常規PCR Kit（一步法）

常規PCR Kit （一步法）

Venor®Gem OneStep

常規PCR Kit（一步法）介紹：

常規PCR法：是根據支原體核糖體16s-23s rRNA的特異保守序列設計引物，對待檢樣本DNA進(jìn)行擴增，通過(guò)對擴增產(chǎn)物的大小分析作出診斷。

優(yōu)點(diǎn)：①靈敏度高，特異性好。②時(shí)間短，2-3小時(shí)出結果。③符合歐洲藥典。④操作簡(jiǎn)單。

缺點(diǎn)：①對于已做支原體滅活處理的樣品，由于支原體DNA仍舊存在其中，PCR結果會(huì )出現假陽(yáng)性。（可用培養法做補充驗證）。②不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大（由于引物及內在設計不同），需謹慎選擇，盡量在專(zhuān)業(yè)人員推薦指導下使用。

『支原體常規PCR檢測試劑盒』介紹：

德國MB公司生產(chǎn)的支原體常規PCR檢測試劑盒，依據操作步驟的細微差別，分一步法和經(jīng)典法兩類(lèi)。此兩類(lèi)試劑盒較全球其他廠(chǎng)家同類(lèi)產(chǎn)品，具有以下*的優(yōu)點(diǎn)：

①高特異性，270bp左右的一條陽(yáng)性對照條帶，涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種，操作簡(jiǎn)單，結果易于觀(guān)察。（使用MB的試劑盒，下表列出的支原體物種均為陽(yáng)性，其他微生物或真核細胞均為陰性。根據16s rRNA序列的同源性比對，該試劑盒可檢測出1種脲原體、7種無(wú)膽甾原體和85種支原體。）

②高靈敏度，1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出。

③試劑盒含內控對照，可防止假陰性的發(fā)生。

④符合歐洲藥典要求。

常規PCR Kit（一步法）適用范圍：

A. 科研用戶(hù)，細胞上清的篩查可選用MB公司生產(chǎn)的支原體常規PCR檢測試劑盒（一步法）。（詳見(jiàn)下文）

【Venor® Gem OneStep (貨號:11-8050)】或【Venor® Gem Advance (貨號: 11-7096)】

B. 對于需遵循藥典要求的生物制藥企業(yè)，可選用MB公司生產(chǎn)的支原體常規PCR檢測試劑盒（經(jīng)典法）。

【Venor® Gem Classic(貨號: 11-1050) 】+ Taq酶  (貨號: 53-1050)】

或【Venor® Gem Classic  (貨號: 11-1050G)】

特點(diǎn)：

1. 內控對照已加在預混液中，無(wú)需另外配置，使用便捷。
2.高特異性，僅一條陽(yáng)性對照條帶，即可涵蓋所有可能感染細胞的支原體物種。

操作簡(jiǎn)單，易于觀(guān)察。

3.高靈敏度，1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出。
4.歐洲藥典要求的26種支原體均可檢出。該試劑盒可檢測出1種脲原體、7種無(wú)膽甾原體和85種支原體。

操作步驟：

下列圖示以Venor® Gem OneStep?支原體?常規PCR?檢測試劑盒?(一步法)( 貨號：11-8050)  為例，具體產(chǎn)品操作以說(shuō)明書(shū)為準。

第1步：樣本處理

第2步：試劑制備

第3步：PCR體系建立

第4步：?jiǎn)?dòng)PCR反應

第5步：電泳結果分析

191bp為內控對照條帶，表明PCR反應正常。

當樣本存在支原體污染時(shí)，由于內控對照與支原體DNA存在競爭，內控對照條帶變弱（例如支原體DNA＞103拷貝）。

陽(yáng)性對照中支原體DNA＞104拷貝，內控對照條帶會(huì )*消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結果。

如果待測樣本對PCR產(chǎn)生抑制，則內控對照條帶變弱（和陰性對照相比），此時(shí)應先進(jìn)行DNA抽提（推薦使用：Venor® Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測。

儲存條件

2~8℃至少12個(gè)月。復溶后必須在-18℃保存。

效期

1年6個(gè)月