生長(cháng)促進(jìn)曲線(xiàn)的測定,是反映胎牛血清(FBS)功能的方法之一。下面締一生物/締一生物專(zhuān)家根據美國藥典的方法,簡(jiǎn)要描述一下美國藥典關(guān)于FBS生長(cháng)促進(jìn)曲線(xiàn)的規定。
細胞生長(cháng)速率的測定經(jīng)常用于確定細胞對外源刺激的反應。定量評估細胞的生長(cháng)狀況是用于監測培養條件一致性的重要方法。細胞傳代的*濃度,*接種密度和倍增時(shí)間都是可被量化的指標,并可用于觀(guān)察趨勢。因此,了解細胞的生長(cháng)動(dòng)力學(xué)對于設計細胞生物學(xué)實(shí)驗非常重要。而細胞生長(cháng)狀況在潛伏期、對數期和平臺期都存在不確定性,在這三個(gè)生長(cháng)階段記錄細胞生長(cháng)狀況,可用于確定細胞群體倍增時(shí)間和細胞周期。細胞進(jìn)入平臺期后可能降低生長(cháng)速率和改變形態(tài),發(fā)生極化和分泌更多的細胞外基質(zhì),使得細胞很難從基質(zhì)上分離下來(lái),細胞在對數期后期的產(chǎn)量zui高,可重復性。
前期細胞接種方法,請見(jiàn)文章《如何準備用于生長(cháng)促進(jìn)曲線(xiàn)測定的細胞》。
測定生長(cháng)促進(jìn)曲線(xiàn),需在第0,1,2,3,4,7天進(jìn)行活細胞計數。
計算平均的活細胞數(貼壁cell/cm2或懸浮細胞/ml)和活力細胞百分比。用半對數坐標制圖,活細胞數對數在Y軸,時(shí)間(天)在X軸。利用跨過(guò)3個(gè)或3個(gè)以上時(shí)間點(diǎn)的線(xiàn)性生長(cháng)曲線(xiàn)計算倍增時(shí)間。
要計算可靠的倍增時(shí)間,截取的生長(cháng)曲線(xiàn)線(xiàn)性值R2應≥0.98。待測樣本的倍增時(shí)間應不少于美國藥典FBS參考標準品的90%。
綜上所述,您是不是已經(jīng)對美國藥典關(guān)于FBS生長(cháng)促進(jìn)曲線(xiàn)的規定,有所了解。如果還有其他疑問(wèn),請咨詢(xún)締一生物/締一生物資深專(zhuān)家。