美國藥典關(guān)于胎牛血清細胞克隆率測定的描述

　　細胞克隆率的測定是評價(jià)胎牛血清功能的兩大方法之一。本文締一生物/締一生物專(zhuān)家為您分析美國藥典關(guān)于胎牛血清細胞克隆率測定的描述。

　　該檢測主要是評估貼壁細胞系的*生長(cháng)狀況。要分析細胞在合適生長(cháng)條件下的增殖能力和單細胞的存活狀況，細胞在低密度下的接種效率或克隆形成是一個(gè)優(yōu)先選擇的方法。對于評估血清批次的品質(zhì)，這是一個(gè)非常靈敏的檢查。該技術(shù)反映出細胞群體的生長(cháng)速率差異，并可區分生長(cháng)速率的變化（克隆大?。┖图毎欠翊婊睿寺盗浚?。因為存在一些細胞的不均一性，因此需記住，細胞在低密度時(shí)，要長(cháng)成單獨的克隆，其生長(cháng)表現會(huì )很不一樣。因此，即使在*生長(cháng)條件下，由于細胞之間的相互作用沒(méi)有了，也很少有細胞能存活?？寺⌒纬墒且粋€(gè)測定細胞存活的實(shí)驗，也用于優(yōu)化細胞培養條件（培養基和血清的選擇）。如果能證實(shí)一個(gè)克隆來(lái)自一個(gè)細胞，那么克隆效率就可以確定下來(lái)。

　　樣本：對于每個(gè)血清批次，加20mlFBS到180mlEMEM中，0.22mm過(guò)濾除菌，4℃保存。

　　細胞制備：該實(shí)驗只用于貼壁細胞 （如HFL1 and Mv 1 Lu）。一周前開(kāi)始制備，2-3天換液。具體制備請參考文章《如何準備用于生長(cháng)促進(jìn)曲線(xiàn)測定的細胞》。

　　分析：以低密度接種細胞（2–50個(gè)細胞/cm2），接下來(lái)固定，染色，計數。

　　1、對每個(gè)細胞系和每個(gè)批次血清，標記10個(gè)直徑60mm的平皿。標記在平皿的側壁靠下部分，包括對照。

　　2、每個(gè)平皿加入5ml含10%待測FBS的培養基，加入400個(gè)細胞。

　　3、在細胞培養箱中37℃，5%CO2孵育10-14天。

　　4、棄掉上清，加入足量石炭酸復紅-亞甲基藍溶液，覆蓋每個(gè)平皿，作用10分鐘。

　　5、棄掉染液，用蒸餾水沖洗幾遍。平皿倒置在吸水紙巾上，風(fēng)干。

　　計數并記錄陽(yáng)性克隆數，以及陽(yáng)性染色克隆的總表面積（mm2）。計算均值和標準差。

　　接受標準：接種效率%=克隆數÷接種細胞數×100，比較FBS批次之間的結果，選擇一個(gè)好的批次用于某個(gè)特定細胞的培養。

　　綜上所述，您是不是已經(jīng)對美國藥典關(guān)于胎牛血清細胞克隆率測定的描述，有所了解。如果還有其他疑問(wèn)，請咨詢(xún)締一生物/締一生物資深專(zhuān)家。