目前普遍使用的支原體檢測方法有幾種？

當我們在養細胞的時(shí)候，有可能會(huì )出現如下的狀況：細胞生長(cháng)緩慢、細胞變形、碎片增加、懸浮細胞容易成團、培養基提前變色、鏡下發(fā)現有小黑點(diǎn)。本文締一生物/締一生物為您分析目前普遍使用的支原體檢測方法有幾種？

1、支原體的分離培養

  它是支原體污染鑒定的金標準，準確，價(jià)格便宜。但支原體在分離培養的過(guò)程中，要長(cháng)出明顯克隆至少需要4周時(shí)間，所需時(shí)間較長(cháng)。

2、ELISA方法

  檢測步驟復雜，出現誤差的幾率較高，對實(shí)驗者操作技巧有要求。同時(shí)試劑盒成本較高，普遍不被選用。

3、DNA熒光染色法

  它采用熒光染色劑Hoechst 33258和支原體DNA富含A-T的區域結合。價(jià)格適中。由于DNA檢測需要將可疑樣品與指示細胞共同培養，因此一般需要幾天后才出結果。有假陽(yáng)性和假陰性，需要與其他方法結合使用。

4、PCR技術(shù)

它根據支原體核糖體16s-23s rRNA的特異保守序列設計引物，對待檢樣本DNA進(jìn)行擴增，通過(guò)對擴增產(chǎn)物的大小分析作出診斷。操作簡(jiǎn)單、速度快，只需2-3小時(shí)即可出結果，通量高，價(jià)格適中。但是，不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的PCR檢測試劑盒由于引物及內在設計的不同，其準確度和敏感度有天壤之別。

目前，被各大實(shí)驗室及生物藥廠(chǎng)普遍選用的是德國Minerva Biolabs公司開(kāi)發(fā)生產(chǎn)的支原體PCR檢測試劑盒。試劑盒在267bp的條帶，涵蓋了歐洲《藥典》中zui易感染細胞的26種支原體亞型，保證了其*的敏感度；通過(guò)內控條帶的設計，防止了假陰性的發(fā)生。我國農業(yè)部在2008年豬藍耳病疫苗研制的重點(diǎn)項目中，實(shí)驗者用此檢測法與培養法做了超過(guò)100次的平行比對實(shí)驗，結果全部一致，假陽(yáng)性率和假陰性率為零。

因此，用PCR方法檢測支原體，其準確性與選擇的試劑盒的質(zhì)量有直接相關(guān)性。

綜上所述，您是不是已經(jīng)對目前普遍使用的支原體檢測方法有幾種，有所了解。如果還有其他疑問(wèn)，請咨詢(xún)締一生物/締一生物資深專(zhuān)家。