微生物法與HPLC法測定葉酸含量方法比較

GB 10765-2010《嬰幼兒配方食品》中規定了葉酸可以作為嬰兒配方食品添加物。因此準確地測定葉酸的含量對嬰幼兒配方產(chǎn)品的生產(chǎn)加工、功效評價(jià)等有重要意義。維生素的檢測方法有儀器法、微生物法和基于微生物法原理的試劑盒法。微生物法是目前應用為廣泛的，也是美國*分析化學(xué)家協(xié)會(huì )的推薦方法。目前，國家標準GB 5009.211-2014《食品中葉酸的測定》和GB 5413.16-2010《嬰幼兒配方食品和乳品中葉酸(葉酸鹽活性)測定》中對食品和嬰兒食品和乳制品中葉酸的測定均采用微生物法。

除微生物法以外，還可以選用液相法測定葉酸的含量。液相色譜法是利用高壓輸液泵將規定的流動(dòng)相泵人裝有填充劑的色譜柱，對供試品進(jìn)行分離側定的色譜方法。注人的供試品，由流動(dòng)相帶入柱內，各組分在柱內被分離，并依次進(jìn)人檢測器，由積分儀或數據處理系統記錄和處理色譜信號。

液相法測定食品中葉酸含量操作方法和所用藥品分析相似：稱(chēng)取磨細的樣品置于離心管中，加入流動(dòng)相液體，超聲波提取15 min－30 min。取出后加入流動(dòng)相定容，搖勻后過(guò)濾，濾液用 HPLC 法分析。

在有限的空間與營(yíng)養成分條件下，微生物的生長(cháng)過(guò)程會(huì )受到競爭與抑制的作用。選用微生物法測定葉酸含量時(shí)，自配的基礎培養基雜質(zhì)含量高，建議使用HiMedia公司生產(chǎn)的葉酸測定用培養基（貨號：M543）。培養基的pH值對L.C生長(cháng)很重要，一般保持在pH6.8~7.2,過(guò)高過(guò)低均不利于細菌生長(cháng)。測定葉酸常用的菌種酪乳酸桿菌（ATCC 7469）。為保證測定管中滴加等量的接種液,接種液可用10mL滅菌針筒吸取，水平固定于鐵架臺上輕輕旋轉推桿，滴加菌液。測定管比色前，應用混勻器將菌液搖勻后進(jìn)行比色。

微生物法與液相色譜法相比較，其優(yōu)點(diǎn)是可以測定成分復雜樣品中的化合物形式葉酸，結果更準確；對于添加劑形式的葉酸則與HPLC法具有同樣的準確度，同時(shí)微生物法具有靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)，檢測限可達到0.01ng·mL-1，而液相色譜法檢出限為10μg·mL-1，且價(jià)格便宜。但微生物法實(shí)驗周期長(cháng)，每周一次的菌種傳代保藏比較繁瑣；液相色譜法的特點(diǎn)是測定結果準確、操作簡(jiǎn)便、省時(shí)省力、分析速度快、分離效果好，是近年來(lái)發(fā)展速度較快的測定葉酸的方法，分析操作方法和所用藥品分析相似，適合檢測純品，但分析成本高，液相色譜儀價(jià)格及日常維護費用貴。