幾種分離空腸彎曲菌的方法介紹

彎曲菌（Campylobacterspp.）是導致人類(lèi)食源性腹瀉的主要病原菌之一，其感染已成為范圍內引起細菌性腸胃炎的主要病因。目前，彎曲菌屬已被鑒定有26個(gè)種。

空腸彎曲菌和結腸彎曲菌是彎曲菌屬中引起大多數的人類(lèi)疾病的主要菌種，由空腸彎曲菌引起超過(guò)90%人類(lèi)疾病感染，除急性腸胃炎，其感染還可并發(fā)嚴重的格林-巴利綜合征，可導致人呼吸肌麻痹而死亡。剩余大多數人類(lèi)疾病由結腸彎曲菌引起。

如何的檢測出空腸彎曲菌，成為了檢測人員關(guān)心的重要問(wèn)題。本文締一生物為您介紹幾種空腸彎曲菌檢測方法。

傳統檢測方法

根據選擇性培養基生長(cháng)特征、鏡檢和諸多生化指標來(lái)判別。根據 ISO10272-2017 方法和國標 GB 4789.9-2014 方法，空腸彎曲菌是能水解馬尿酸鹽的彎曲菌，并且是區分空腸彎曲菌和結腸彎曲菌的生化指標。一般步驟分樣品處理、增菌與預增菌、分離、鑒定四個(gè)步驟，菌種分離是實(shí)驗成功的關(guān)鍵問(wèn)題。

分離空腸彎曲菌締一生物為您推薦使用HiMedia公司（微生物公司）彎曲菌顯色培養基（貨號：M2020）進(jìn)行分離。常見(jiàn)的空腸彎曲菌分離平板為mCCDA，HiMedia在mCCDA平板上進(jìn)行改良，可支持彎曲桿菌的豐饒生長(cháng)，在此培養基中呈現淺紫至紫色的菌落，比通常mCCDA平板容易分離，可對食品和臨床樣品對彎曲桿菌進(jìn)行選擇性分離和鑒定。

傳統檢測方法具有儀器、設備要求不高，檢測成本低等優(yōu)點(diǎn)，目前仍是質(zhì)檢部門(mén)檢測彎曲菌的主要檢測方法。

免疫傳感器方法

生物傳感器是對生物物質(zhì)敏感并能將其濃度轉換為電信號等進(jìn)行檢測的儀器。它是由固定化的生物敏感材料作識別元件（包括酶、抗原、抗體、微生物、細胞、組織、核酸等生物活性物質(zhì)）、信號轉換器（如氧電極、光敏管、場(chǎng)效應管、壓電晶體等）及信號放大裝置構成的分析工具或系統組成。待測物與識別元件發(fā)生作用后，所得產(chǎn)物（光、熱等）通過(guò)信號轉換器轉變?yōu)榭梢暂敵龅碾娦盘?、光信號等，從而達到分析檢測物的目的。

基于生物傳感器的方法自動(dòng)化程度高，對人員的要求不高，可實(shí)現對樣品的現場(chǎng)實(shí)時(shí)無(wú)損檢測，但在食品基質(zhì)中的檢測效果一般。

基于質(zhì)譜的方法

基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新型的用于微生物鑒定和分型的技術(shù)。其原理是用激光照射樣品與基質(zhì)形成的共結晶薄膜，基質(zhì)從激光中吸收能量，樣品解吸附，基質(zhì)-樣品之間發(fā)生電荷轉移使得樣品分子電離，電離的樣品在電場(chǎng)作用下飛過(guò)真空飛行管，通過(guò)離子的質(zhì)量電荷之比（M/Z）與離子的飛行時(shí)間成正比來(lái)分析離子，并測得樣品分子的分子量。不同的細菌經(jīng)過(guò) MALDI-TOF-MS 檢測可以形成特異性的指紋圖譜，將待測菌的指紋圖譜與已有的質(zhì)譜圖譜庫比較，即可確定細菌種屬。

基于質(zhì)譜的方法雖然快速可靠，但主要應用于對純菌株的鑒定分型，要達到直接從樣品中分析彎曲菌菌種的目的，則需要調整試驗策略建立一系列適合彎曲菌的重現性好的分析方法。

實(shí)時(shí)熒光 PCR 法

實(shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù)是將傳統的 PCR 擴增和檢測相結合，在 PCR 反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監測整個(gè) PCR 進(jìn)程，通過(guò)標準曲線(xiàn)對未知模板進(jìn)行定性定量分析的方法。根據熒光標記方法一般分為染料法和探針?lè )ā?/span>

與傳統的 PCR 相比，實(shí)時(shí)熒光 PCR 方法具有特異性更強、靈敏度更高、自動(dòng)化程度高、有效解決 PCR 污染問(wèn)題等優(yōu)點(diǎn)，在 21 世紀初已廣泛應用于各種領(lǐng)域，包括彎曲菌等食源性致病菌的快速檢測中。但對人員的要求較高，也需特定的較為昂貴的儀器，使其在實(shí)際應用中受限。

檢測空腸彎曲菌的方法很多，各有利弊，建立一個(gè)更快速簡(jiǎn)便、更穩定可靠、更準確、更低成本的彎曲菌檢測技術(shù)是保證公共衛生和食品安全的迫切需求?？梢灶A見(jiàn)，多種檢測技術(shù)的有機結合和優(yōu)勢互補有望解決上述需求。