海產(chǎn)品中副溶血性弧菌檢測方法

副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus，V.p)是一種革蘭氏陰性嗜鹽菌，是海水和江河口環(huán)境中的固有微生物。它能通過(guò)食物和水引起人類(lèi)的疾病，同時(shí)也對生長(cháng)在海水和江河口環(huán)境中的動(dòng)物有致病性，包括養殖的動(dòng)物。

V.p廣泛存在于各種海產(chǎn)品中，魚(yú)體帶菌率約為20％～90％。一般情況下，海產(chǎn)品體內外均帶菌，但當海產(chǎn)品作為食品被捕撈后，體外菌體迅速死亡，體內的副溶血性弧菌會(huì )很快感染整個(gè)海產(chǎn)品。

中國水產(chǎn)品出口國主要集中在日本、美國、歐盟和韓國，僅這四大市場(chǎng)就占到了總出口量的85％左右。而這四個(gè)國家對進(jìn)口水產(chǎn)品的安全要求中都明確規定副溶血性弧菌等致病菌一律不得檢出。對原產(chǎn)自中國的進(jìn)口水產(chǎn)品強制性要求進(jìn)行V.p檢測，檢測結果為陽(yáng)性時(shí)產(chǎn)品將被就地銷(xiāo)毀，這給我國水產(chǎn)品的出口設置了貿易壁壘。

為了減少我國食品在進(jìn)出口貿易中的經(jīng)濟損失，消除消費者的食品安全隱患，締一生物為您流行的檢測方法進(jìn)行總結歸納，以便為檢測方法的應用和發(fā)展提供參考。

傳統培養法

副溶血性弧菌的傳統培養法是指國家標準、行業(yè)標準等，通常認為是食品檢測的“金標準”，目前副溶血性弧菌的主要依據GB 4789.7—2013《食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 副溶血性弧菌檢驗》的方法，從樣品中分離出副溶血性弧菌，經(jīng)過(guò)樣本制備、增菌、分離、純培養、初步鑒定、確定鑒定幾個(gè)步驟，分離副溶血性弧菌一般用TCBS平板。

近年來(lái)，國標中規定，可用顯色培養基分離。顯色培養基是在生化反應的基礎上開(kāi)發(fā)的技術(shù)，利用鑒別性培養基的原理，向分離培養基中加入細菌特異性酶的顯色底物，以達到只須用肉眼辨別顏色就能方便地從近似的菌落中找出目的菌落的目的。檢測結果直觀(guān)，易于觀(guān)察，減少了進(jìn)行純培養和生化鑒定的步驟，大大提高了檢測效率。且具有成本低、特異性強、靈敏度高和檢測快速、操作方便等優(yōu)點(diǎn)，是國內外微生物檢測的一個(gè)主要發(fā)展方向。

締一生物推薦您使用在HiMedia公司（微生物公司）的HiCrome弧菌顯色培養基（貨號：MV1682），在顯色培養基上，細菌β-半乳糖苷酶和培養基中所包含底物的反應發(fā)生顯色反應，副溶血性弧菌呈藍綠色。與此同時(shí)，還可以分離出霍亂弧菌，霍亂弧菌在該培養基上呈紫色，易于分離。

免疫學(xué)法

主要包括酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和免疫層析試紙條技術(shù)。ELISA是常見(jiàn)的免疫學(xué)檢測方法，該方法實(shí)現了在細胞水平上對抗原或抗體的示蹤，或在微克、甚至納克水平上對抗原(致病菌)或抗體的定量。

免疫層析試紙條技術(shù)，該技術(shù)是20世紀80年代初發(fā)展起來(lái)的，因其具有簡(jiǎn)便、快速、廉價(jià)、適應性廣等優(yōu)點(diǎn)，可用于基層單位對各種食源致病菌的快速篩查檢測。依據反應時(shí)

抗原與抗體結合方式的不同，主要可將其分為雙抗夾心免疫層析法和競爭免疫層析法兩類(lèi)。

分子生物學(xué)法

主要有PCR技術(shù)，包括常規PCR、多重PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR等，該方法特異性強、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、省時(shí)、對標本的純度要求低、不需要分離細菌等特點(diǎn)，因此在國內外被研究人員廣泛應用于V.p的檢測。

PCR檢測方法本身存在一定的缺陷：一是細胞死后其DNA不能快速降解，導致環(huán)境DNA污染而出現假陽(yáng)性結果；二是食品中很可能存在對PCR反應起抑制作用的物質(zhì)而出現假陰性結果；三是這種分子檢測方法需要價(jià)格昂貴的PCR儀，不適于基層推廣應用。在運用PCR方法進(jìn)行實(shí)物檢測過(guò)程中，要注意避免樣品中的外源DNA污染和雜質(zhì)對PCR反應的干擾作用。”

締一生物作為HiMedia公司在中國的代理商，在微生物培養和檢測領(lǐng)域，一如既往地為您帶來(lái)的服務(wù)。