食源性大腸桿菌 O157：H7 的檢測方法簡(jiǎn)介

隨著(zhù)國內生活水平的提升，食品的消費量呈逐年上升的趨勢，但同時(shí)也面臨著(zhù)食品安全方面的威脅。大腸桿菌O157:H7是一種重要的食源性致病菌，屬于腸桿菌科埃希氏菌屬，是腸出血性大腸桿菌中具代表性的血清型。大腸桿菌 O157∶H7 的主要研究方法有傳統分離鑒定法、分子生物學(xué)法和免疫學(xué)法，根據同種研究方法的相似原理，搭建不同的檢測平臺，來(lái)構建致病菌的多種檢測手段。

傳統分離鑒定法

傳統分離鑒定法需要通過(guò)液體培養基培養提前增菌 10～20 h，然后將其定量涂布到培養皿上，37 ℃培養 18~24 h。利用絕大多數大腸桿菌O157∶H7 菌株不發(fā)酵山梨醇的特性，可以在山梨醇麥康凱瓊脂（SMAC）培養基上進(jìn)行初步分離，培養的大腸桿菌 O157∶H7 菌落呈無(wú)色半透明。但有其他血清型的大腸桿菌 O157 和革蘭氏陰性菌如變形菌等也不發(fā)酵山梨醇，會(huì )造成假陽(yáng)性。

締一生物向您介紹一款上HiMedia公司的生產(chǎn)的大腸桿菌O157：H7顯色培養基（CT-SMAC平板）貨號：M1340。該培養基中含有山梨醇和BC指示劑，不含乳糖。大多數大腸菌群菌株 會(huì )發(fā)酵山梨醇，產(chǎn)生酸。當pH值低于6.8時(shí)，培養基中的中性紅會(huì )變成粉紅色。同時(shí)普通大腸桿菌具有ß-D葡萄糖醛酸酶，當遇到培養基中BC指示劑時(shí)，會(huì )呈現藍綠色。當兩種顏色疊加時(shí)，普通大腸桿菌在此種培養基中，會(huì )呈現藍紫色。用于從食物和動(dòng)物飼料中選擇性分離大腸桿菌O157:H7。

大腸桿菌O157:H7不發(fā)酵山梨醇，也不具備ß-D葡萄糖醛酸酶活性，因而在此種培養基中產(chǎn)生的菌落為無(wú)色。如果需要，此培養基還可添加 碲酸鹽頭孢克肟添加劑（FD147），可使培養基更具有選擇性。亞碲酸鉀可使大腸桿菌O157選擇性生長(cháng)，并抑制嗜水氣單胞菌和普羅維登菌的生長(cháng)；頭孢克肟可抑制變形桿菌。

傳統分離培養法的檢測費用低廉，在食品大腸桿菌 O157:H7 的檢測中作為主要手段，廣泛應用于檢測領(lǐng)域。

分子生物學(xué)檢測方法

大腸桿菌 O157:H7 的全基因組已獲得，并收錄在 Genebank 中。在此基礎上，大腸桿菌 O157:H7 的檢測衍生出了一系列分子生物學(xué)方法，主要有聚合酶鏈式反應（PCR）技術(shù)（包括普通 PCR、實(shí)時(shí)熒光 PCR、多重 PCR 等）、基因芯片技術(shù)和噬菌體檢測技術(shù)。

用分子生物學(xué)法檢測大腸桿菌 O157:H7，檢測過(guò)程相對簡(jiǎn)單，檢測靈敏度較高，但因大腸桿菌 O157:H7 一般在食品中的污染量很低，為保證檢測結果的準確性仍需要一定的增菌培養過(guò)程，且其檢測的特異性會(huì )一定程度上受食品成分的影響。

免疫學(xué)檢測方法

例如免疫膠體金試紙檢測法 免疫膠體金層析技術(shù)以硝酸纖維素膜為載體，以膠體金作為標記物，樣品滴加至微膜孔后，在毛細管作用下，通過(guò)抗原抗體特異性結合，利用膠體金顏色反應，達到檢測抗原或抗體的免疫標記技術(shù)。該方法以其檢測快速、檢測成本低、靈敏度高、適合現場(chǎng)檢測等優(yōu)點(diǎn)在檢測領(lǐng)域中快速發(fā)展，但易出現假陽(yáng)性結果。

利用免疫學(xué)檢測技術(shù)可大大縮短檢測時(shí)間，提高檢測靈敏度，但需要高特異性的抗體，同時(shí)對于不同種類(lèi)的食品需要優(yōu)化不同的對應體系以達到更好的檢測效果。