Vero細胞的無(wú)血清培養

Vero細胞是日本學(xué)者Yasumura等于1962年從正常成年非洲綠猴腎分離獲得的貼附依賴(lài)性細胞系，Vero一詞由世界語(yǔ)中的verde（意為綠色的）和reno（意為腎臟的）兩個(gè)詞合并而成。Vero細胞是世界衛生組織和我國生物制品規程認可的疫苗生產(chǎn)細胞系。

與用作疫苗生產(chǎn)的原代細胞、二倍體細胞和其他一些傳代細胞基質(zhì)相比，Vero細胞具有以下特點(diǎn)：

①來(lái)源方便，連續傳代，生長(cháng)速度快；

②對多種病毒的感染敏感、病毒增殖滴度高；

③遺傳性狀穩定，惡性轉化程度低，生物安全性較高；

④培養條件要求不苛刻，易于在生物反應器實(shí)施大規模培養。

疫苗的接種對象主要是大范圍的健康人群，其質(zhì)量和安全性一直是備受關(guān)注的問(wèn)題。

疫苗的質(zhì)量和安全性在很大程度上取決于疫苗的生產(chǎn)方式和過(guò)程。血清是一種組分復雜而尚不*明確的混合物，至少含有1000種不同的蛋白質(zhì)，總蛋白量高達60～150g／L，它能為細胞的體外培養提供必要的生長(cháng)因激素、細胞貼附因子和營(yíng)養成分。受Vero細胞自身的貼附依賴(lài)生長(cháng)特性和動(dòng)物細胞培養技術(shù)發(fā)展進(jìn)程的影響，本世紀之前的Vero細胞培養及病毒疫苗生產(chǎn)均存在著(zhù)對血清的依賴(lài)。

血清組分的復雜性和不確定性，以及其中存在病毒等病原微生物污染的潛在風(fēng)險，影響著(zhù)病毒疫苗的生產(chǎn)工藝和疫苗質(zhì)量。從病毒疫苗生產(chǎn)工藝角度考慮，血清組分的復雜性和批次間的質(zhì)量差異增加了病毒疫苗生產(chǎn)的不穩定性和產(chǎn)品質(zhì)量控制的難度；從病毒疫苗的安全性角度考慮，血清中潛在的病原微生物，如引起牛海綿狀腦炎的朊病毒，給疫苗的使用帶來(lái)了不容忽視的安全隱患。

由血清使用所造成的細胞培養過(guò)程和細胞表達產(chǎn)物安全性的不確定因素增加的現實(shí)問(wèn)題，成為動(dòng)物細胞無(wú)血清培養技術(shù)研究和應用的發(fā)展動(dòng)因。隨著(zhù)動(dòng)物細胞無(wú)血清培養技術(shù)的不斷進(jìn)步，為包括Vero細胞在內的動(dòng)物細胞大規模無(wú)血清培養技術(shù)的應用提供了必要的技術(shù)支撐，無(wú)血清培養已成為包括疫苗在內的生物技術(shù)藥物生產(chǎn)的總趨勢。2010年，美國、歐盟和日本等發(fā)達國家將全面停止在生物制藥中應用血清，FDA將停止含血清細胞培養工藝生產(chǎn)的生物技術(shù)新藥的申報受理。

上HiMedia公司生產(chǎn)的SFRE199-1培養基是病毒生產(chǎn)細胞培養基M199的改良型。SFRE199分為I型和II型，即SFRE199-1和SFRE199-2。和M199相比，SFRE199顯著(zhù)升高了8種氨基酸的濃度，包括精氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸，也升高了葡萄糖的濃度，使能獲得較好的細胞生長(cháng)而不表現出毒性。

另外，加入了硫酸鋅、丙酮酸鈉和胰島素，降低了硝酸鐵、黃嘌呤和碳酸氫鈉的濃度，還添加了半乳糖，以避免乳酸過(guò)度積累，并使細胞在維持的延長(cháng)期內，pH值保持在生理范圍。

國外有研究表明，SFRE 199-1可作為無(wú)血清培養基的基礎成分，用于Vero細胞的培養，并在Vero細胞靜置培養中，以SFRE199-1為基礎的無(wú)血清培養基可獲得較好的細胞生長(cháng)效果。

Vero細胞無(wú)血清培養基的優(yōu)化主要涉及以下兩方面。其一，從提高病毒疫苗安全性的需要出發(fā)，以非動(dòng)物來(lái)源成分替代動(dòng)物來(lái)源成分、化學(xué)組分明確成分替代化學(xué)組分不確定成分；其二，從提高病毒疫苗生產(chǎn)效率的目的考慮，根據細胞生長(cháng)和代謝動(dòng)力學(xué)特征優(yōu)化培養基的組成。

但無(wú)血清培養也存在一定不足，如：

①目前多數無(wú)血清培養基的通用性較低，應用不廣泛，不具有普遍性；

②目前低血清培養基研究開(kāi)發(fā)的相關(guān)數據缺乏在線(xiàn)交流，可查閱的資料有限，不能有效促進(jìn)細胞馴化技術(shù)的發(fā)展；

③無(wú)血清培養基的制作成本較高，不利于商業(yè)化開(kāi)發(fā)與應用；

④細胞在無(wú)血清培養基中，對外界條件如物理和化學(xué)等因素的改變較敏感，等。

締一生物作為HiMedia公司在中國的代理商，在細胞培養、微生物培養和檢測領(lǐng)域，一如既往地為您帶來(lái)的服務(wù)。