Vero細胞無(wú)血清培養基的設計和優(yōu)化

培養基是影響體外培養細胞生長(cháng)代謝、增殖乃至生存的直接和重要的環(huán)境因素。Vero細胞無(wú)血清培養的技術(shù)關(guān)鍵在于無(wú)血清培養基的設計和優(yōu)化。設計Vero細胞無(wú)血清培養基組成配方的技術(shù)核心是篩選和確定具有促進(jìn)細胞貼附生長(cháng)、維持細胞存活、提高病毒擴殖效果的培養基組成成分。

基于細胞生長(cháng)和代謝的高通量分析及Plackett-Burman實(shí)驗設計和Box-Behnken響應面設計是Vero細胞無(wú)血清培養基設計和優(yōu)化的主要技術(shù)。Vero細胞的培養需要在適宜的介質(zhì)表面貼附、鋪展才開(kāi)始有絲分裂、增殖，病毒的有效感染和增殖也有賴(lài)于細胞的貼附生長(cháng)狀態(tài)。

此外，在某些病毒疫苗(如流感病毒疫苗)的生產(chǎn)過(guò)程中，需要在培養基中加人一定濃度的胰蛋白酶以提高病毒的感染和增殖效率。

另一方面，病毒的感染和增殖不僅是細胞代謝負荷不斷加大的過(guò)程，也是細胞病變、以致凋亡和壞死、甚至裂解的漸進(jìn)性過(guò)程。Vero細胞無(wú)血清培養基的設計和優(yōu)化相對于應用于動(dòng)物細胞懸浮培養工藝生產(chǎn)重組蛋白、特別是治療性抗體生產(chǎn)的無(wú)血清培養基更具挑戰性。

設計Vero細胞無(wú)血清培養基的較為便捷和有效的策略是以DMEM，F-12, M199和RPMI1640等商品化的合成培養基的單獨使用或聯(lián)合使用為基礎培養基，以反映細胞生長(cháng)和代謝的主要參數為評價(jià)指標，結合統計學(xué)方法確定向其中添加生長(cháng)因子、激素、結合蛋白及豁附因子、微量元素、脂類(lèi)和脂類(lèi)前體物等的種類(lèi)和濃度。

締一生物為您推薦一款可用于Vero細胞無(wú)血清培養的基礎培養基，由HiMedia公司生產(chǎn)的SFRE199-1和SFRE199-2，是培養基M199的改良款。其改變了M199培養基的部分營(yíng)養成分配方，主要在增加了氨基酸和葡萄糖的濃度，并加入硫酸鋅、丙酮酸鈉和魚(yú)精蛋白鋅胰島素。另外，還降低了硝酸鐵、黃嘌呤和碳酸氫鈉的濃度。SFRE 199-1有Hank's鹽；SFRE 199-2含有Earle's鹽，不含胰島素，可在使用前自行添加。

無(wú)血清培養基中常用的黏附因子主要是存在于細胞間質(zhì)和血清中的胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)蛋白，如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、玻連蛋白和膠原等。其中，纖粘連蛋白和層粘連蛋白不僅具有提高細胞的砧附力及活力的作用，同時(shí)在促進(jìn)有絲分裂中也起著(zhù)重要的作用。某些含有精氨酸一甘氨酸一天冬氨酸(RGD)序列的短膚也能夠有效地促進(jìn)Vero細胞貼附到以聚苯乙烯和醋酸纖維素為材料的介質(zhì)表面。

Vero細胞無(wú)血清培養基的優(yōu)化主要涉及以下兩方面。其一，從提高病毒疫苗安全性的需要出發(fā)，以非動(dòng)物來(lái)源成分替代動(dòng)物來(lái)源成分、化學(xué)組分明確成分替代化學(xué)組分不確定成分，其二，從提高病毒疫苗生產(chǎn)效率的目的考慮，根據細胞生長(cháng)和代謝動(dòng)力學(xué)特征優(yōu)化培養基的組成。

締一生物作為HiMedia公司在中國的代理商，在細胞培養、微生物培養及檢測領(lǐng)域，一如既往地為您帶來(lái)的服務(wù)。