各種Vero細胞培養液的成分比較

近10年來(lái)，低血清和無(wú)血清Vero細胞培養基的開(kāi)發(fā)受到了重視，一些研究機構發(fā)布了自己的研究結果。其中，無(wú)血清細胞培養基開(kāi)發(fā)的難度大，因為無(wú)血清培養系統中的細胞對于的pH值、溫度、滲透壓、機械力和酶處理更為敏感。換用無(wú)血清培養基時(shí)，每次傳代常需采用較高的密度接種細胞，有時(shí)細胞還需要馴化。性能的細胞培養基則要求能促進(jìn)細胞的生長(cháng)、存活率和細胞活力，培養的病毒增殖較快，同時(shí)價(jià)格不過(guò)于昂貴。

許多低血清和無(wú)血清Vero細胞培養基以傳統的合成培養基為基礎。有機構研究了DMEM／F12、M199、RPMI1640及MEM∶DMEM／F12四種培養基對流感病毒增殖的影響1。具體過(guò)程為：在上述培養基中分別加入濃度為1.0μg／ml的 TPCK胰酶，配制病毒培養液，調整pH為8.0。將T-225細胞培養瓶中長(cháng)成致密單層的SFM-Vero細胞，經(jīng)0.125%的胰蛋白酶消化后傳代后，置37℃培養36h；洗液洗滌3次，以MOI = 0.1接種H5N1流感病毒，33℃吸附1h；加入病毒培養液，置33℃培養72h，收獲病毒液，測定血凝效價(jià)。結果顯示，細胞培養時(shí)間為36 h。以DMEM／F12為基礎培養基時(shí)，病毒收獲液的血凝效價(jià)均高于其他培養基，M199僅次于DMEM／F12。

又有機構比較了含10%新生牛血清的M199和MEM培養基對Vero細胞生長(cháng)的影響。發(fā)現M199顯著(zhù)好于MEM。M199培養的細胞活力為94.35%，MEM為80.50%，M199的細胞濃度為60萬(wàn)/ml，而MEM為47.5萬(wàn)/ml2。

由于細胞培養基的成分較為復雜，且各個(gè)成分對細胞培養存在一定的協(xié)同作用，故以上結論僅作一定程度上的參考。DMEM／F-12是DMEM和F-12以1:1的比例混合而成，F-12配方則是以Ham's F-10 培養基為基礎，提高了膽堿、肌醇、腐胺和幾種氨基酸的濃度，初是用于在無(wú)血清的條件下培養 CHO 細胞。M199培養基則常用于疫苗生產(chǎn)、病毒學(xué)以及多種非轉化細胞的培養。初的開(kāi)發(fā)目的是找到一種成分明確的、不含動(dòng)物來(lái)源成分的培養基。有報道將M199改良后，Vero細胞培養效果優(yōu)于M199，且病毒滴度更高3。

SFRE M199即是一款M199的改良型，初用于原代狒狒腎(Bak)細胞的生長(cháng)和維持，后用于Vero細胞的貼壁培養。它在M199培養基基礎上添加了胰島素、丙酮酸鈉、硫酸鋅，并提高了精氨酸-鹽酸、半胱氨酸、胱氨酸、L -谷氨酰胺、L -谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸和葡萄糖的濃度。它還添加了半乳糖，以避免乳酸過(guò)度積累，并使pH值在細胞延長(cháng)的維持期內，保持在生理范圍。生物科學(xué)公司HiMedia生產(chǎn)有SFRE M199的1型和2型。二者均含有L-谷氨酰胺、半乳糖和葡萄糖。SFRE M199-2（貨號AT090）含有Earle's鹽，而SFRE M199-1含有Hank鹽。兩種鹽的主要差別在于碳酸氫鈉的水平, 碳酸氫鈉在Eagles (2.2g/L)比在Hanks (0.35g/L) 中高。選用哪種取決于培養環(huán)境中的CO2濃度。

SFRE M199-1與DMEM／F-12的成分作比較，可以發(fā)現，SFRE M199-1不含DMEM／F-12所含有的硫酸銅、硫酸亞鐵、亞油酸、腐胺、硫鋅酸，但含有DMEM／F-12所不含的核苷類(lèi)成分，如一磷酸腺苷、胸腺嘧啶、尿嘧啶、脫氧核糖、硫酸腺嘌呤等，這些成分都與DNA的合成有關(guān)。另外，在一些共有成分上，兩種培養基的成分濃度互有高低，如SFRE M199-1的甘氨酸、丙氨酸、天門(mén)冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸、酪氨酸、生物素、丙酮酸鈉的濃度都比DMEM／F-12要高，DMEM／F-12的異亮氨酸、賴(lài)氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸、蘇氨酸、泛酸鈣、葉酸、吡哆醛鹽酸鹽、肌醇、葡萄糖、次黃嘌呤濃度比SFRE M199-1的成分濃度高。

目前，由于配方保密，關(guān)于Vero細胞無(wú)血清或低血清培養基的具體成分并未*公開(kāi)。由于改良型M199以及Vero細胞用SFRE M199培養時(shí)有報道3、4、5可見(jiàn)想見(jiàn)，SFRE M199取代M199來(lái)大規模培養Vero細胞，是將來(lái)發(fā)展的趨勢。

HiMedia Laboratories公司是的培養基生產(chǎn)廠(chǎng)家，其生產(chǎn)通過(guò)了ISO9001、ISO13485、WHO-GMP的質(zhì)量管理體系認證。締一生物作為中國區代理商，在生物制藥，疫苗生產(chǎn)，科研，臨床治療等領(lǐng)域，提供有可靠的各種培養基及進(jìn)口血清、支原體檢測試劑等，持續不斷地為中國生物產(chǎn)業(yè)的發(fā)展助力。

參考文獻

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2. 薛英，等.不同培養基及不同的葡萄糖濃度對VERO細胞生長(cháng)狀況的影響.草食家畜.2010,12(4):70-71

3. 陳嘉雯,等.改良M199培養基在Vero細胞培養中的適用性.中國生物制品血雜志.2014,1(27):76-81

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5. Jack Litwin. The growth of Vero cells as suspended aggregates in serum-free medium.Animal Cell Technology, 1992: 414-417