方便雙歧桿菌計數的顯色培養基

近年來(lái)，雙歧桿菌作為益生菌，越來(lái)越得到人們的重視。一方面，在生產(chǎn)中，需要進(jìn)行雙歧桿菌的培養，另一方面，在酸乳等食品乳品中，又需要雙歧桿菌的計數。因為雙歧桿菌只有活菌數達到106 CFU/mL以上時(shí)，才能發(fā)揮正常生理功能；數量太少，則達不到保健的效果。

在培養雙歧桿菌時(shí)，需要了解雙歧桿菌為專(zhuān)性厭氧菌，適宜生長(cháng)的環(huán)境pH值為6.7~7.0。它為革蘭氏陽(yáng)性，無(wú)運動(dòng)性，包括至少25個(gè)種，適合生長(cháng)溫度在25℃-45℃。雙歧桿菌對碳水化合物的代謝終產(chǎn)物為乳酸和醋酸。

雙歧桿菌原本可以作為指示菌，因為它在糞便中出現的頻率非常高。有人研究發(fā)現，嬰兒出生后母乳喂養一周，腸道中雙歧桿菌數可占92%，而健康成年人僅有10%。但雙歧桿菌生長(cháng)緩慢，且嚴格厭氧，培養很不方便，因此并沒(méi)有作為糞便的指示菌。

當今食品發(fā)展的趨勢是，應用雙歧桿菌越來(lái)越多，且乳桿菌與雙歧桿菌同時(shí)添加。這種混合發(fā)酵，多見(jiàn)于酸奶與保健品。在酸奶中，常應用嗜熱鏈球菌與保加利亞乳桿菌在牛奶中發(fā)酵 , 以使產(chǎn)品具有酸奶特有的細膩圓潤的凝乳狀態(tài)。而如果只單一使用雙歧桿菌發(fā)酵，則風(fēng)味與口感不佳。但混合發(fā)酵也帶來(lái)一個(gè)問(wèn)題，即給雙歧桿菌的計數帶來(lái)麻煩。一方面，雙歧桿菌與乳桿菌都屬于乳酸菌，性能接近，另一方面，雙歧桿菌隨著(zhù)傳代次數增多，會(huì )發(fā)生變異成桿狀，因此通過(guò)鏡下形態(tài)鑒別不太可靠。如果能有一款商品化的雙歧桿菌顯色培養基，則可給雙歧桿菌的鑒別和計數帶來(lái)極大的便捷。

世界微生物培養基生產(chǎn)商HiMedia開(kāi)發(fā)有一款雙歧桿菌顯色培養基（品名：HiCrome™
Bifidobacterium Agar），它可用于雙歧桿菌與乳桿菌混合發(fā)酵的酸乳等制品菌落的鑒別計數。該顯色培養基中含有特別蛋白胨、牛奶蛋白、氯化鈉、顯色劑和瓊脂。牛奶蛋白能檢測雙歧桿菌的酪蛋白水解活性，從而使菌落表現出光暈。顯色劑則可鑒別乳桿菌和雙歧桿菌。乳桿菌屬通常表現為綠色菌落和霧狀背景（發(fā)酵乳桿菌例外，菌落為粉色，無(wú)光暈），雙歧桿菌則根據物種不同，菌落顏色也有所區別：嬰兒雙歧桿菌表現為深藍色至藍綠色菌落。短雙歧桿菌表現為粉紅色菌落，并且有光暈。據了解，雙歧桿菌在成人體內的菌種主要是青春雙歧桿菌和長(cháng)雙歧桿菌。在嬰兒為嬰兒雙歧桿菌和短雙歧桿菌。

圖. 右上為嬰兒雙岐桿菌ATCC 25962，左上為短雙歧桿菌ATCC 15698，下為植物乳桿菌ATCC 8014

雙歧桿菌在許多制品以及人和動(dòng)物腸道內，大多與其他菌（如乳酸菌）混合生長(cháng)，而且生長(cháng)特點(diǎn)相近，很難區分。要對其進(jìn)行計數，需設計特定的選擇培養基。雙歧桿菌顯色培養基一方面要求能保證雙歧桿菌的生長(cháng)，同時(shí)要求選擇性高，對雜菌的抑制性強，雙歧桿菌菌落呈現顯著(zhù)的顏色或形態(tài)上的特征。傳統培養雙歧桿菌培養時(shí)間較長(cháng)，需要 96小時(shí)才能出結果，而該顯色培養基則只需在無(wú)氧條件下35-37℃孵育48小時(shí)，即可知道準確結果。顯色培養方法的特異性也很高，能夠保證培養結果的準確性。

HiCrome™
雙歧桿菌顯色培養基能快速有效地檢測雙歧桿菌，這對于辨別產(chǎn)品中添加雙歧桿菌的數量具有重要意義。HiCrome™
雙歧桿菌顯色培養基能實(shí)現一步培養直接計數，基本能夠滿(mǎn)足實(shí)驗室對雙歧桿菌初步檢測計數的需要，特別適合不擁有大型細菌鑒定儀的中小企業(yè)和第三方實(shí)驗室。

圖. 短雙歧桿菌

圖. 植物乳桿菌