植物蛋白胨在細胞無(wú)血清培養中的應用

由于TSE和其他動(dòng)物病毒的存在，替代改用非動(dòng)物源材料逐漸成為藥廠(chǎng)的趨勢。其中，植物源蛋白胨越來(lái)越得到廣泛的應用。它作為營(yíng)養成分，不僅可用于微生物的培養，而且可用于生產(chǎn)細胞無(wú)血清培養基的開(kāi)發(fā)。

早在2004年，比利時(shí)的研究機構就發(fā)現，植物蛋白水解物支持CHO-320細胞的增殖和重組干擾素的表達1。

他們在已開(kāi)發(fā)的無(wú)蛋白成分的培養基基礎上，添加一些植物蛋白水解物，發(fā)現整體培養基的性能即可達到含血清培養基的水平。研究人員發(fā)現，在添加了燕麥蛋白水解物的無(wú)蛋白培養基中，微載體懸浮CHO-320細胞，細胞在生物反應器中分泌重組的干擾素γ提高了60%，大細胞密度升高了25%（和無(wú)添加其他成分的無(wú)蛋白成分培養基比較）。

在另一個(gè)小規模的灌流系統中，CHO-320細胞在纖維微載體表面和內部培養，研究人員發(fā)現大米蛋白水解物能刺激重組IFN-r的分泌升高到30%(和對照組比較）。在生物反應器中也得到了相似的結果。但在搖瓶中培養時(shí)，微載體內存在著(zhù)營(yíng)養、氧氣和毒性代謝產(chǎn)物濃度梯度的局限。但隨著(zhù)灌流速率的增加，葡萄糖濃度維持高于5.5mM，溶解氧為60%時(shí)，持續此狀態(tài)培養160小時(shí)，即能刺激IFN-γ的生成水平達到6.6μg/h/g微載體，細胞密度達到4X108細胞/g微載體。

研究人員認為，植物蛋白胨可作為廉價(jià)的血清部分替代物，同時(shí)保證了生物安全性。該研究中同時(shí)公布了使用的無(wú)蛋白成分培養基的配方。5:5:1 (v:v:v) 比例混合Iscove’s MDM, Ham’s F12和NCTC 135培養基，進(jìn)一步添加谷氨酰胺到6mM終濃度，以及32.5mM NaHCO3，60μM乙醇胺，從而構成了基礎培養基（BDM）。

要懸浮培養CHO細胞，BDM中進(jìn)一步添加了0.1% pluronic F68，0.04pM ya硒suan鈉和500μM的檸檬酸鐵（鐵和檸檬酸1:1），從而終構成了無(wú)蛋白成分培養基（PFS）。之后，即向PFS中添加了上述兩種植物蛋白水解物。

作者認為，植物蛋白水解物刺激細胞生長(cháng)和分泌，不單單是因為營(yíng)養成分，很可能是因為其中多肽成分能和細胞表面的受體相互作用，從而發(fā)生效應。

HiMedia公司是的培養基生產(chǎn)商，在開(kāi)發(fā)有一系列的植物蛋白水解產(chǎn)品（HiVeg標識），這些植物蛋白來(lái)源包括玉米、豌豆、大豆、小麥、大米、燕麥、棉籽等。其中，細胞培養級的非動(dòng)物源水解物有酵母粉、燕麥水解物、大豆蛋白胨、棉花水解物、乳清蛋白水解物（貨號TC733）等，出廠(chǎng)前均經(jīng)細胞培養測試，確保質(zhì)量。

HiMedia公司具有WHO-GMP認證、ISO9001，ISO13485質(zhì)量體系認證，以及產(chǎn)品的CE和FDA注冊登記。其產(chǎn)品已行銷(xiāo)140多個(gè)國家。