在生物制藥領(lǐng)域,動(dòng)物源原料存在安全風(fēng)險,針對此風(fēng)險,各大藥典制定了相關(guān)規范:
如《歐洲藥典》(EP8.0,2014)第5.2.8章強調了醫用產(chǎn)品的生產(chǎn)應優(yōu)先考慮使用“非TSE相關(guān)動(dòng)物物種材料”或“無(wú)動(dòng)物源材料”,使安全風(fēng)險低化。
《美國藥典》也明確規定,為減少TSE傳播的潛在風(fēng)險,建議使用無(wú)動(dòng)物源生產(chǎn)原料代替動(dòng)物源原料。
在疫苗生產(chǎn)領(lǐng)域,無(wú)動(dòng)物源培養基的使用不僅可以使安全風(fēng)險小化,而且存在諸多優(yōu)點(diǎn)。
疫苗生產(chǎn)用『無(wú)動(dòng)物源』培養基的優(yōu)點(diǎn)
生產(chǎn)疫苗使用的動(dòng)物源細胞培養基,具有潛在的安全風(fēng)險,且存在批間差異,審批手續繁瑣等問(wèn)題。
而無(wú)動(dòng)物源培養基有著(zhù)極大地*性:
1.無(wú)動(dòng)物源培養基*避免了因原材料導致接種者感染外源病毒的風(fēng)險
2.防止了動(dòng)物源原料帶來(lái)的病毒干擾目標病毒
3.無(wú)血清的配方,使細胞懸浮培養更容易,減少細胞成團,利于疫苗廠(chǎng)大規模懸浮培養
4.無(wú)動(dòng)物源配方,批間差異更小,利于工業(yè)化穩定生產(chǎn)
5.原料無(wú)動(dòng)物源成份,使疫苗審批的申報流程更簡(jiǎn)便
6.無(wú)動(dòng)物源培養基,在海關(guān)進(jìn)口時(shí),手續更簡(jiǎn)便,保證原料更快捷地能及時(shí)供應
無(wú)動(dòng)物源培養基已被疫苗生產(chǎn)廠(chǎng)家大量使用,其中一款Himedia公司研制的新型的CELLin1™培養基,更是因其應用面廣,細胞培養效果佳,病毒產(chǎn)量大,而表現上佳。
CELLin1™培養基適用的疫苗品種范圍
CELLin1™適用于以下疫苗生產(chǎn)常用的5種細胞
CELLin1™作為一種
新型『無(wú)動(dòng)物源』培養基,
專(zhuān)門(mén)用于培養上述五種細胞,
且具有非常好的培養效果。
CELLin1™『病毒生產(chǎn)能力』和『促細胞生長(cháng)能力』
驗證報告
1.實(shí)驗信息
本實(shí)驗使用CELLin1™無(wú)動(dòng)物源培養基與競品OptiPRO™SFM (Gibco)無(wú)動(dòng)物源培養基分別培養細胞。
實(shí)驗選用的細胞系:
MDBK細胞,牛皰疹病毒1型(BHV-1)
MDCK細胞,流感病毒A
PK-15細胞,豬圓環(huán)病毒2型(PCV)
Vero細胞,狂犬病毒
B.實(shí)驗觀(guān)測指標
1.病毒產(chǎn)生能力(96孔板內進(jìn)行)
1.1生長(cháng)曲線(xiàn):檢測培養基維持細胞生長(cháng)和達到高細胞密度和高活力的能力
1.2病毒滴度:檢測培養基支持病毒在宿主細胞內繁殖的能力
2.種子制備和細胞存儲
宿主細胞系的存儲和種子制備是病毒疫苗生產(chǎn)前的2個(gè)主要步驟。通過(guò)連續傳代,檢測CELLin1™支持宿主細胞生長(cháng)的能力。
C.實(shí)驗結果
MDBK細胞
采用CELLin1™培養MDBK細胞,
BHV1病毒滴度用TCID50 (108)表示(下圖)。
數據表明,CELLin1™培養的細胞少反而得到了更大的病毒產(chǎn)量,CELLin1™培養的MDBK細胞更健康、更有活力,產(chǎn)毒能力更強。
MDBK細胞在T175培養瓶中,
用CELLin1™或競品培養基培養和連續傳代。
當細胞長(cháng)至70-80%時(shí)進(jìn)行傳代(下圖)。
CELLin1™連續五代培養的MDBK細胞數量遠高于競品,而且細胞生長(cháng)更穩定。
MDCK細胞
采用CELLin1™培養MDCK細胞,
流感病毒A滴度用TCID50 (108)表示(下圖)。
數據表明,CELLin1™培養的MDCK細胞產(chǎn)毒能力更強。
連續五代培養,CELLin1™培養的MDCK細胞數量遠高于競品,對細胞的支持非常穩定。
PK-15細胞
采用CELLin1™培養PK-15細胞,
豬圓環(huán)病毒滴度用TCID50 (108)表示(下圖)。
數據表明,CELLin1培養基更適合PK-15細胞生長(cháng)。
PK-15細胞在T175培養瓶中,
用CELLin1™或競品培養基培養和連續傳代。
當細胞長(cháng)至70-80%時(shí)進(jìn)行傳代(下圖)。
連續五代培養,CELLin1™培養的PK-15細胞數量均高于競品,對細胞的支持非常穩定。
Vero細胞
采用CELLin1™培養Vero細胞,
狂犬病毒滴度用TCID50(108) 表示(下圖)。
數據表明,CELLin1™培養的細胞少反而得到了更大的病毒產(chǎn)量。CELLin1™培養的Vero細胞更健康、更有活力,產(chǎn)毒能力更強。
Vero細胞在T175培養瓶中,
用CELLin1™或競品培養基培養和連續傳代。
當細胞長(cháng)至70-80%時(shí)進(jìn)行傳代(下圖)。
通過(guò)連續五代培養,與競品的細胞密度對比,CELLin1™對Vero細胞的支持非常穩定。
D. 結論
CELLin1™支持Vero、PK-15、MDCK、MDBK細胞生長(cháng)和病毒繁殖的能力已得到了驗證。
在這些細胞系中,CELLin1™顯示出的病毒生產(chǎn)能力和促細胞生長(cháng)能力。
因而,CELLin1™可有效的作為通用培養基用于Vero、PK-15、MDCK、MDBK細胞的病毒生產(chǎn)。
CELLin1™的配制方法
CELLin1™是一款化學(xué)限定的
疫苗生產(chǎn)用『無(wú)動(dòng)物源』培養基,
分為A、B兩個(gè)部分。
A部分為基礎培養基,
呈白色至淺粉色均勻粉末,2-8 ℃避光保存。
B部分為生長(cháng)添加劑,
呈無(wú)色透明溶液,-20 ℃保存.
1L規格的CELLin1™配制步驟
取11.5g A部分用900ml組織培養級別水重懸,持續攪拌直至粉末*溶解。不要加熱。
加入2.70g碳酸氫鈉粉末或36.0ml 7.5%碳酸氫鈉溶液配制1升培養基。攪拌至溶解。
加入584mg的L-谷氨酰胺粉末或加入20mL濃度為200mM的L-谷氨酰胺以制備1升培養基。攪拌至溶解。
用1mol/L的HCl或1mol/L的NaOH將pH調節至低于理想pH值0.2-0.3單位水平,因為pH值在過(guò)濾后趨于上升。
用組織培養級別水將體積補足至1000ml。
立即用孔徑≤0.22μM濾器過(guò)濾培養基以滅菌。使用正壓而非真空抽濾,以減少CO2的丟失。
在2-8℃解凍生長(cháng)添加劑(B部分)。
在A(yíng)部分和B部分放入生物安全柜之前,對兩部分瓶子表面噴灑異丙醇進(jìn)行消毒。
在無(wú)菌條件下將B部分全部?jì)热菸镛D移至1L基礎培養基(A部分)中,輕輕混合。
配置*的培養基可直接使用。儲存時(shí),*培養基在2-8℃下的保質(zhì)期為8周。
注:在使用過(guò)程中,還需要細胞的無(wú)血清馴化。
CELLin1™產(chǎn)品信息
品名:CELLin1™化學(xué)限定疫苗生產(chǎn)用無(wú)動(dòng)物源成分培養基
英文名:CELLin1™ Chemically defined, Animal Component Free Virus Production medium
貨號:SFM036AP
生產(chǎn)商:HiMedia Laboratories
生產(chǎn)地:印度
組成:
A部分為基礎培養基,干粉,2-8℃保存
B部分為生長(cháng)添加劑,液體,-20 ℃保存
內毒素含量:小于1EU/ml
市場(chǎng)價(jià):
1L/套 ¥950
10L/套 ¥8000
廠(chǎng)家介紹:
HiMedia Laboratories公司是世界的培養基生產(chǎn)廠(chǎng)家。HiMedia公司總部位于印度,50年致力于微生物培養基和細胞培養基的研發(fā)生產(chǎn),在制藥等工業(yè)生產(chǎn)中被廣泛應用,其產(chǎn)品行銷(xiāo)140多個(gè)國家。尤其是HiMedia公司的非動(dòng)物源培養基,在上占地位。
HiMedia公司生產(chǎn)的培養基都具備
WHO GMP、ISO9001、
ISO13485質(zhì)量管理體系認證
和CE、FDA注冊登記,
能更好地應用于工業(yè)化生產(chǎn)。
2019年,HiMedia公司的CELLin1™產(chǎn)品正式進(jìn)入中國,由北京締一生物作為總代理。北京締一生物被中國生物界譽(yù)為值得“持續信賴(lài)的供貨商”,在細胞培養的工業(yè)化生產(chǎn)領(lǐng)域有著(zhù)專(zhuān)業(yè)的技術(shù)背景,為國內疫苗生產(chǎn)(如流感疫苗,禽流感疫苗,豬藍耳疫苗等)提供了有力的幫助和支持。
現今我們引入CELLin1™給科研人員和工業(yè)藥廠(chǎng),希望能幫助藥廠(chǎng)進(jìn)一步發(fā)展,使我國疫苗生產(chǎn)領(lǐng)域能邁上一個(gè)全新的高度!