植物源TSB——無(wú)菌工藝模擬的理想選擇

無(wú)菌制劑的藥企至少每半年需要一次無(wú)菌工藝模擬（APS），又稱(chēng)為培養基灌裝試驗（MFT），以保證生產(chǎn)線(xiàn)的無(wú)菌生產(chǎn)。以往APS多用胰酪大豆胨液體培養基（簡(jiǎn)稱(chēng)TSB）。但歐洲藥典EP 8.0-2014已提出非動(dòng)物源材料的優(yōu)先選擇原則，以避免動(dòng)物源成分可能帶來(lái)的BSE/TSE風(fēng)險。BSE/TSE發(fā)生率低，但在動(dòng)物體內有潛伏期，沒(méi)有明顯癥狀，且一旦發(fā)現，影響巨大，故WHO、FDA與CE均有專(zhuān)章討論降低BSE/TSE發(fā)生風(fēng)險的措施。我國近年發(fā)布的《無(wú)菌工藝模擬試驗指南（無(wú)菌制劑）》、《無(wú)菌工藝模擬試驗指南（無(wú)菌原料藥）》對此亦有提及：“包含動(dòng)物來(lái)源成分的培養基，應考慮培養基引入外源污染的風(fēng)險。如BSE（可傳染性海綿腦?。?、TSE（瘋牛?。┑蕊L(fēng)險”，并說(shuō)“亦可使用植物來(lái)源的培養基”。（見(jiàn)《無(wú)菌工藝模擬試驗指南（無(wú)菌原料藥）》6.3.2.4條）

如植物源TSB性能與動(dòng)物源TSB相符，且價(jià)格一致，則可不必考慮BSE/TSE等動(dòng)物源成分帶來(lái)的外源因子風(fēng)險問(wèn)題。在性能方面，《指南》規定有“培養基促生長(cháng)能力試驗”，所用標準測試菌株包括白色念珠菌（CMCC98001）、黑曲霉（CMCC98003）、枯草芽孢桿菌（CMCC63501）、金黃色葡萄球菌（CMCC26003）、銅綠假單胞菌（CMCC10104）和生孢梭菌（CMCC64941）（必要時(shí)）等。“還可考慮加入環(huán)境和無(wú)菌檢查中發(fā)現的典型微生物。促生長(cháng)試驗接種量應小于100CFU。”

植物源TSB可采用濕熱滅菌和輻照滅菌，無(wú)論何種滅菌方式，均“應對滅菌過(guò)程進(jìn)行驗證，輻照滅菌還需在產(chǎn)品質(zhì)量報告中體現驗證中所用的菌種和劑量等信息”。

早在2007年，Journal of Microbiological Methods(微生物學(xué)方法期刊）就發(fā)表了美國ATCC參與的一項研究，表明在促生長(cháng)能力方面，植物源TSB*可以替代動(dòng)物源TSB。菌株的表型會(huì )發(fā)生輕微的變化，但不影響菌株品系的遺傳學(xué)特征，即菌種鑒定不受影響。文中沒(méi)有提所用植物源TSB的品牌。

在推動(dòng)植物源培養基應用方面，HiMedia公司走在世界前列，不僅將各種植物源培養基配方標準化，而且具有世界比較多的植物源培養基品種，不少被載入2010年美國CPC學(xué)術(shù)出版社出版的第四版《微生物培養基手冊》。在A(yíng)PS的應用方面，HiMedia公司推出了一系列植物源TSB產(chǎn)品，具體如下：

1、植物源TSB（輻照），粉末型，貨號MV011G

2、植物源TSB（輻照），顆粒型，貨號GMV011G

3、植物源TSB（輻照），粉末型，含MTF指示劑，貨號MV2018G

4、化學(xué)限定TSB（輻照），粉末型，含MTF指示劑，貨號MCD2018G

值得一提的是，顆粒型和粉末型培養基相比，沒(méi)有揚塵和受潮的問(wèn)題。TSB中添加MTF指示劑，可通過(guò)顏色變化顯著(zhù)區分是否有菌，見(jiàn)下圖?；瘜W(xué)限定TSB的好處是無(wú)批間差異。

HiMedia生產(chǎn)的植物源TSB（輻照，粉末型，貨號MV011G）經(jīng)過(guò)嚴格而全面的質(zhì)控，合格后方能出廠(chǎng)。HiMedia生產(chǎn)工藝也具有ISO9001、ISO13485、WHO-GMP質(zhì)量體系認證，產(chǎn)品具有美國FDA注冊和歐盟IVDD注冊證書(shū)。

MV011G的部分質(zhì)控項目包括：

注：以下方法均根據美國藥典和歐洲藥典的方法進(jìn)行。

1、滅菌過(guò)程的驗證

包括無(wú)菌檢查（連續14天30-35℃培養未觀(guān)察到細菌生長(cháng)，25-25℃培養未觀(guān)察到真菌生長(cháng)）和支原體檢測（PCR）。該無(wú)菌檢查同時(shí)也進(jìn)行有檢查過(guò)程的驗證，即培養基用標準菌株接種≤100cfu進(jìn)行測試，細菌在20-25℃培養不超過(guò)3天，真菌不超過(guò)5天，以驗證如有如下菌種，則該培養基即能檢查出來(lái)（表現為旺盛生長(cháng)）。具體所用菌株包括：金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸桿菌ATCC8739、大腸桿菌ATCC25922、大腸桿菌NCTC9002、銅綠假單胞菌ATCC9027、銅綠假單胞菌ATCC27853、藤黃微球菌ATCC9341、阿博尼沙門(mén)氏菌NCTC6017、肺炎鏈球菌ATCC6305、枯草芽孢桿菌ATCC6633、鼠傷寒沙門(mén)氏菌ATCC14028、金黃色葡萄球菌ATCC6538、白色念珠菌（ATCC10231）、白色念珠菌（ATCC 2019）、巴西曲霉（ATCC 16404）。以上信息即回答了《指南》要求的“輻照滅菌還需在產(chǎn)品質(zhì)量報告中體現驗證中所用的菌種和劑量等信息”。

2、培養基促生長(cháng)能力試驗

菌株接種量≤100cfu，培養條件30-35°C 18-24小時(shí)。所用標準菌株有金黃色葡萄球菌ATCC 6538、金黃色葡萄球菌ATCC 25923、大腸桿菌 ATCC 8739、大腸桿菌 ATCC 25922

大腸桿菌NCTC 9002、銅綠假單胞菌 ATCC 9027、銅綠假單胞菌ATCC 27853、枯草芽孢桿菌ATCC 6633、藤黃微球菌ATCC9341、鼠傷寒沙門(mén)氏菌ATCC 14028、阿博尼沙門(mén)氏菌NCTC6017、肺炎鏈球菌ATCC 6305。以上菌株即已包括《指南》提到的幾乎所有菌株，只是用的是ATCC來(lái)源的。對于《指南》提到的白色念珠菌（CMCC98001）和黑曲霉（CMCC98003），在滅菌驗證中測試過(guò)。只有《指南》提到的生孢梭菌（CMCC64941）沒(méi)有測試，指南提到是必要時(shí)才去測試，企業(yè)可自行測試。

3、穩定性檢查

這一點(diǎn)指南未作要求。HiMedia質(zhì)控要求室溫下放置7天，仍為淡黃色溶液，無(wú)任何沉淀產(chǎn)生。

總之，HiMedia生產(chǎn)的植物源TSB系列產(chǎn)品能滿(mǎn)足《指南》的各種要求，能夠給藥企的APS提供便利，值得大力推廣。

締一生物作為HiMedia公司中國區總代理，在制藥和生命科學(xué)領(lǐng)域，一如既往地為您帶來(lái)的服務(wù)。