只用一招，簡(jiǎn)單的祛除細胞上的支原體!

細胞培養怕支原體污染，但有一些被污染的細胞不能被丟棄時(shí)該怎么辦？今天小編把上慣用的一個(gè)小絕招教給你，簡(jiǎn)單有效！

如何祛除細胞上的支原體污染？

據研究表明，約98％的支原體存在于細胞表面和細胞間隙。支原體直徑約180~350nm，比細胞小很多，經(jīng)低速離心與細胞分離。通過(guò)反復懸浮沖洗、離心，加上使用我們的Zell Shield®，即可在細胞培養四代以?xún)扔行У仂畛гw。

什么是Zell Shield®？

Zell Shield®是一種鏈青霉素類(lèi)復合抗生素，

對細胞影響很小，可以有效抑制細胞培養中的

支原體、細菌、霉菌、真菌等微生物增殖。

普通的鏈霉素、青霉素對支原體沒(méi)有效果。

那為什么Zell Shield®有效呢？

因為Zell Shield®是由Minerva公司生產(chǎn)的專(zhuān)門(mén)針對支原體的抗生素。

德國Minerva公司是由著(zhù)名的羅伯特·科赫研究所中分離出來(lái)的，專(zhuān)注于支原體、細菌的污染控制，尤其以支原體和軍團菌的祛除、檢測而聞名。Zell Shield®是Minerva公司的一產(chǎn)品，不但對細胞培養中的細菌、真菌、霉菌有效，更是對支原體的祛除有確切效果。

具體是怎么操作呢？

1.首先把被支原體污染的細胞消化下來(lái)，

放入離心管離心，棄上清。

再加入干凈的PBS懸浮沖洗細胞、

低速離心（300~500r/min）、棄上清，

反復三次。

這樣可祛除細胞表面60％~70％的支原體，

支原體還剩約30％~40％.

2.細胞加入含1％Zell Shield®的新鮮培養基，

傳代培養。

這時(shí)因培養基中Zell Shield®的抑制作用

細胞培養過(guò)程中，

雖然細胞增殖，但殘留的支原體無(wú)法增殖。

細胞需再次傳代時(shí)，把第二代細胞消化下來(lái)，

離心，棄上清。

加入新鮮PBS懸浮沖洗、再離心、棄上清，

反復三次，

這時(shí)，細胞上殘留的支原體大約已剩余為初污染量的10％左右。

3.細胞加入含1％Zell Shield®的新鮮培養基，

傳代培養。

需再次傳代時(shí)把第三代細胞消化下來(lái)，

離心，棄上清。

加入新鮮PBS懸浮沖洗、再離心、棄上清，

反復三次，

可再次祛除60％~70％的殘余支原體，

通過(guò)沖洗、抑制、換液等操作，

細胞中支原體的殘留污染量大約只剩3％左右。

4.細胞加入含1％Zell Shield®的新鮮培養基，

傳代培養。

需再次傳代時(shí)把第四代細胞消化下來(lái)，

離心，棄上清。

加入新鮮PBS懸浮沖洗、再離心、棄上清，

反復三次，

可再次祛除60％~70％的支原體，

此時(shí)，支原體殘留量大約已低于1％.

支原體的增殖亦有密度要求，

用Zell Shield®處理過(guò)四代的細胞，

即便撤掉Zell Shield®，

只要保證沒(méi)有新的支原體人為再次帶入，

原有支原體也無(wú)法再增殖，

隨著(zhù)傳代，換液，支原體的老化、死亡，

細胞中的支原體污染基本就*解決了。

敲黑板，劃重點(diǎn)啦

1.每次傳代時(shí)，重復三次對細胞懸浮沖洗步驟非常重要，操作要正確、規范，以達很好效果！

2.在培養基中加入1％Zell Shield®抑制支原體增殖！

3.使用安全的血清、培養基等試劑，不再有新的支原體加入！

做到以上三點(diǎn)即可確保祛除支原體污染。

Zell Shield®工作原理是什么？

支原體祛除劑Zell Shield®（培養基用）

是一種即用型鏈青霉素類(lèi)的復合抗生素，

在培養基中1%的濃度

通過(guò)阻止原核生物DNA及蛋白的合成，

抑制細胞培養中遇到的

細菌、真菌、霉菌增殖，

更可以有效、精確地抑制支原體增殖，

且對細胞基本安全。

品名：支原體祛除劑Zell Shield®（培養基用）

生產(chǎn)商：Minerva Biolabs GmbH

生產(chǎn)地：德國

貨號：13-0050

規格：50mL/瓶

儲存溫度：-18℃

使用注意事項：實(shí)驗室初次使用，注意分裝，分裝后的小包裝Zell Shield®仍-20℃避光冷凍保存，現配現用。

貨期：大多數時(shí)間國內有現貨