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為什么有些細胞實(shí)驗無(wú)法重復？
為什么有的細胞在相當長(cháng)的時(shí)間里，都養不到好狀態(tài)？
為什么實(shí)驗室中，超過(guò)一株以上的細胞都時(shí)好時(shí)壞？
細胞生長(cháng)緩慢、細胞變形、碎片增加、懸浮細胞容易成團、培養基提前變色、鏡下發(fā)現有小黑點(diǎn)……
如果排除了其他試劑選擇不當、細胞株老化、細菌污染等原因，而仍有上述一種或幾種情況，則高度提示——你的細胞可能被支原體污染了！
圖. 電鏡下的支原體
支原體污染普遍存在
據美國數據統計，細胞發(fā)生支原體污染的幾率在70%以上。同時(shí)，由于支原體直徑很小，僅在180nm~350nm之間，只有通過(guò)電鏡才能看到，不易被實(shí)驗者肉眼發(fā)覺(jué)，支原體污染逐漸成為一個(gè)普遍存在的問(wèn)題。
支原體污染的危害
支原體污染是個(gè)循序的過(guò)程，普通抗生素對其無(wú)效。因此，支原體污染有多煩人，相信實(shí)驗人都領(lǐng)教過(guò)了。
1、細胞狀態(tài)不佳，生長(cháng)速度慢，實(shí)驗無(wú)法推進(jìn)。
2、細胞內DNA、RNA及蛋白表達發(fā)生改變，影響實(shí)驗結果，導致實(shí)驗數據不準確，時(shí)間、經(jīng)費的浪費。
3、一株污染的細胞成為實(shí)驗室的污染源，對工作區域以及培養箱和液氮罐造成污染，進(jìn)而污染其他細胞，導致其他細胞繼發(fā)性污染，實(shí)驗受影響，數據無(wú)法重復，預期結果出不來(lái)。
如何有效把支原體趕出細胞？
對于已耗費很多時(shí)間、大量擴增起來(lái)的細胞，或經(jīng)過(guò)基因轉染、體外刺激等大量工作處理過(guò)的細胞，如果發(fā)現細胞被支原體污染了，怎么辦？由于前期工作量巨大，我們無(wú)法丟棄已有細胞。但由于價(jià)格原因，又無(wú)法使用那些昂貴試劑殺除細胞上的支原體，同時(shí)，實(shí)驗人員還需要清除細胞上的支原體污染，讓實(shí)驗得以往下推進(jìn)，以終獲得準確的實(shí)驗數據。
實(shí)驗者可選用對支原體*的抑制劑，通過(guò)對細胞的前期處理，中期加藥，逐步通過(guò)4代左右的培養，從而將支原體污染*清除，確保試驗順利推進(jìn)，結果準確。*此類(lèi)試劑眾多，締一生物生物周?chē)膶?shí)驗人做過(guò)很多嘗試，其中效果確切且性?xún)r(jià)比很高的當屬德國Minerva公司的ZellShield®祛除劑。
Zell Shield®是一種即用型新型復合抗生素，副作用極低，能有效地祛除細胞培養支原體、細菌、真菌污染。Zell Shield®使用方法簡(jiǎn)單，直接加入培養基中保護細胞。
它的原理：通過(guò)抑制支原體增殖中某種蛋白的合成，達到抑制新的支原體增殖的目的。屬復合型的新型抗生素。它廣泛適用于細胞培養相關(guān)的科研和工業(yè)領(lǐng)域。
特點(diǎn)
1、適用范圍廣
普通細胞培養和原代細胞培養
2、無(wú)細胞毒性
目前，Zell Shield®對多種細胞系都無(wú)細胞毒性。
3、高效廣譜
祛除支原體效果明顯，同時(shí)對細胞內和細胞外的革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽(yáng)性菌、病原蟲(chóng)、真菌等污染亦可有效預防。
4、操作簡(jiǎn)便
可直接加入到預處理的培養基或細胞中進(jìn)行消毒。
5、穩定性高
在細胞孵育期內，Zell Shield®始終保持穩定的活性。
6、低耐藥風(fēng)險
精心挑選的新型復合抗生素只有極低的耐藥風(fēng)險，多種抗生素聯(lián)合使用幾乎不會(huì )產(chǎn)生耐藥突變株。
操作步驟：
第1步：研究發(fā)現，98%的支原體污染發(fā)生在細胞間隙。因此，首先要把細胞消化下來(lái)，放入離心管，懸浮沖洗，離心，棄上清，反復三次。此時(shí)可將細胞上大部分的支原體去除，為進(jìn)一步加藥抑制做好準備。
第二步：培養液中加入1%的ZellShield®，細胞進(jìn)行正常培養。新的支原體增殖受到抑制，舊的支原體隨著(zhù)細胞的換液逐步減少，通過(guò)4代左右的培養，細胞中的支原體基本可被*清除。
注：使用ZellShield®時(shí)，不需使用鏈青霉素。
此試劑價(jià)格約2200元/50ml，可保證大量細胞的實(shí)驗得以順利推進(jìn)。
總之，細胞培養中，支原體污染發(fā)生頻繁。有時(shí)帶來(lái)的危害會(huì )造成實(shí)驗的巨大損失。應經(jīng)常檢測和及時(shí)排除支原體污染，讓細胞在健康安全的環(huán)境下生長(cháng)，為獲得準確的實(shí)驗結果，打下良好的基礎。
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