怎樣給細胞做支原體篩查

細胞培養是實(shí)驗室的常規操作和科研基礎。其中，保證細胞不受支原體的污染是決定實(shí)驗成敗的重要環(huán)節。然而，支原體污染細胞的發(fā)生率又非常高,有報道高達63%。

那么，這些支原體污染是從哪里來(lái)的呢？

?？梢?jiàn)以下來(lái)源：

特別是支原體的污染能通過(guò)細胞操作產(chǎn)生的氣溶膠或液滴傳播。一瓶被支原體污染的細胞足以威脅到其他培養的細胞。因此，定期對細胞培養基、細胞培養上清進(jìn)行支原體的監測是非常重要的。

在支原體的各種檢測方法中，常規PCR法以其

①靈敏度高，特異性好；

②時(shí)間短，2-3小時(shí)出結果；

③操作簡(jiǎn)單；

④無(wú)須昂貴儀器等特點(diǎn)廣受青睞。

但不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異較大（由于引物及內在設計不同），需謹慎選擇，盡量在專(zhuān)業(yè)人員推薦指導下使用。

這里小編向您推薦的是德國Minerva Biolabs公司的常規PCR檢測試劑盒（一步法）（英文名：Venor®Gem OneStep），它經(jīng)過(guò)許多用戶(hù)使用過(guò)，*。

產(chǎn)品介紹

其中貨號11-8025、11-8050為常備現貨。

優(yōu)勢

①高特異性。如存在支原體污染，則只在270bp左右有一條陽(yáng)性條帶，無(wú)雜帶現象，方便辨識。對其他物種如細菌、真核生物DNA無(wú)交叉反應。

②可檢測的支原體種類(lèi)豐富。支原體屬柔膜體綱、支原體目，下分為支原體科、無(wú)膽甾原體科和脲原體科，一共有100多種。Venor®Gem一步法試劑盒可檢測85種支原體科成員(含所有污染細胞的常見(jiàn)支原體)、7種無(wú)膽甾原體和1種脲原體，十分全面。

③所需樣本量少，僅需2ul。

④靈敏度高，靈敏度高，即使每個(gè)反應只有20個(gè)基因組拷貝，也可以檢測出來(lái)。

⑤結果可靠。檢測時(shí)含陰性對照、陽(yáng)性對照和內控對照，可避免假陰性和假陽(yáng)性。

⑥試劑穩定，操作簡(jiǎn)單。試劑盒內的PCR mix和陽(yáng)性對照均為凍干粉，穩定性強。只需復溶后即可立即使用，除樣品外，無(wú)須添加其他試劑。PCR mix已包含內控對照，無(wú)須再單獨添加（因此被稱(chēng)為一步法）。

適用范圍

適用于支原體的篩查。適合細胞培養物和生物樣品，僅作研究使用，不適合藥廠(chǎng)的放行檢測。不適合臨床診斷。

操作步驟

第1步：樣本處理

第2步：試劑制備

第3步：PCR體系建立

第4步：?jiǎn)?dòng)PCR反應

第5步：電泳結果分析

191bp為內控對照條帶，表明PCR反應正常。

當樣本存在支原體污染時(shí)，由于內控對照與支原體DNA存在競爭，內控對照條帶變弱（例如當支原體DNA＞103拷貝時(shí)）。

當支原體DNA＞104拷貝時(shí)，內控對照條帶會(huì )*消失。

在80-90bp可能存在引物退火形成的二聚體條帶，此條帶不影響檢測結果。