現在，PCR試劑盒常用于各種檢測。其中di檢出限是PCR試劑盒一個(gè)重要的參數。PCRdi檢出限就是所能檢測到的靶標的di值。di檢出限的確定應通過(guò)定量標準品來(lái)完成。定量標準品一般是經(jīng)過(guò)嚴格標定拷貝數的陽(yáng)性DNA，梯度稀釋后進(jìn)行一系列的檢測，每個(gè)梯度做8個(gè)復孔，終確定條帶能否觀(guān)測到或確定Ct值。

 示例. PCR定量標準品（支原體）（Minerva Biolabs）

接著(zhù)可用Reed-Muench公式計算方法的檢測限（LOD50），lgLOD50=距離比例×稀釋對數質(zhì)檢的差+高于50%檢出率的稀釋度的對數。距離比例=（高于50%檢出率的百分數-50%）/（高于50%檢出率的百分數-低于50%檢出率的百分數）。也可使用Excel軟件在回歸分析中，自動(dòng)計算LOD值（Data>Data Analysis>Regression，選中X，Y值）

PCRdi檢出限相當于方法的靈敏度，它與DNA模板的質(zhì)量（包括是否有雜質(zhì)）、整個(gè)PCR反應體系的性能優(yōu)化（包括反應緩沖液、酶的功能、引物序列、引物濃度）、PCR程序條件的設定都有關(guān)系。有人采用巢式PCR，的確使得方法的靈敏度更高，但同時(shí)也增加了反應的復雜性和反應時(shí)間。

總之，PCR具有足夠低的檢測限，才能保證不會(huì )發(fā)生漏檢。因此，在方法學(xué)意義上，di檢測限應受到足夠的重視。

參考文獻：

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