慢病毒載體從哪里來(lái)

病毒不是光對人有害，也有對人有益的、被人改造而為人類(lèi)造福的，如慢病毒。它可攜帶基因，因此又被稱(chēng)為慢病毒載體

慢病毒載體具有可感染分裂細胞及非分裂細胞，轉移基因片段容量較大，目的基因表達時(shí)間較長(cháng)，不易引發(fā)宿主免疫反應等諸多優(yōu)點(diǎn)。因此，慢病毒載體已成為基因治療中載體研究的熱點(diǎn)。

慢病毒能使攜帶的基因整合至宿主細胞的基因組內，且能利用病毒攜帶的調控元件，使目的基因隨宿主細胞特異性表達。

目前，慢病毒載體還在不斷的改進(jìn)，使得它在生物安全性上不斷提高，

感染效率不斷增進(jìn)。293T，慢病毒載體的包裝細胞，為貼壁依賴(lài)型成上皮樣細胞，生長(cháng)培養基為含10%胎牛血清（FBS）的DMEM 高糖培養基。放于37℃，5% CO2

細胞培養箱中培養。

轉染前48 h，用胰蛋白酶消化生長(cháng)狀態(tài)良好的 293T 細胞，利用含10%胎牛血清的DMEM 高糖培養基，6×105 細胞/10 mL，種植于10 cm 細胞培養皿，37℃、5% CO2 培養箱內培養。待細胞密度達70%～80%時(shí)即可用于轉染。良好的細胞狀態(tài)對于病毒的包裝有更好的效果。

要盡量保證細胞傳代次數在10 代以?xún)?。轉染前2 h，將細胞培養基更換為無(wú)血清無(wú)抗生素的培養基。

收集轉染后48 h（轉染時(shí)間即可為 0 計起）的293T 細胞上清液（72h的也可收集）。以0.45 μm濾器過(guò)濾上清液于50 mL無(wú)菌無(wú)酶離心管中，病毒在4℃可以保存幾天，但要長(cháng)期保存，應在-20℃或-80℃保存。

可見(jiàn)，慢病毒的生產(chǎn)離不開(kāi)宿主細胞（如293T細胞）的良好狀態(tài)。高品質(zhì)的胎牛血清則是293T細胞生長(cháng)的必要保證。

下面介紹質(zhì)量和服務(wù)較好的胎牛血清應具備的要素：

 1. 精選內毒素更低批次（≤3EU/ml）。

    2. 新批次在試用前，提供試用服務(wù)。

    3. 每個(gè)批次產(chǎn)量充足，如在800-2000升，試用滿(mǎn)意后，批號可先鎖定，避免反復更換批次，保證數據穩定。

    4. 多批次平行供應，也可多種選擇。

    5. 具有完整的檢測報告，為項目申報提供支持。

    6. 血清全程冷鏈運輸，確保無(wú)反復凍融。

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