研究揭示miR-133a的轉錄調控機制及其在細胞分化中的作用

9月9日，學(xué)術(shù)期刊Cell Death & Disease發(fā)表了中國科學(xué)院生物物理研究所衛濤濤課題組與美國Creighton大學(xué)屠亞平課題組的合作論文，這是衛濤濤課題組與屠亞平課題組長(cháng)期合作所取得的又一成果。研究人員發(fā)現，miR-133a表達的上調促進(jìn)了線(xiàn)粒體生物發(fā)生和肌細胞分化，并進(jìn)一步通過(guò)“定向染色質(zhì)構象捕獲”（CAPTURE）技術(shù)找到了調控miR-133a表達的上游調控因子KAP1，從而加深了對miR-133a轉錄調控機制及重要功能的了解。

microRNA（miRNA）在多種生理及病理生理過(guò)程中起著(zhù)重要的調控作用。在前期工作中，衛濤濤課題組與屠亞平課題組密切合作，通過(guò)分子、細胞及動(dòng)物實(shí)驗證明，TGF-β1誘導表達的miR-133a可通過(guò)負反饋調節的方式作用于TGF-β1受體及其效應分子，負調控TGF-β1信號通路，從而抑制甚至部分逆轉特發(fā)性肺纖維化（IPF）的進(jìn)程，相關(guān)論文于2019年9月11日發(fā)表于Cell Death & Disease雜志。

鑒于miR-133a的重要生理及病理生理學(xué)作用，探明其調控機制將對治療肺纖維化等相關(guān)疾病提供重要的線(xiàn)索。衛濤濤課題組與屠亞平課題組進(jìn)一步以成肌細胞分化過(guò)程中miR-133a動(dòng)態(tài)表達為模型，使用基于CRISPR/Cas9的CAPTURE技術(shù)，結合高通量測序及生物信息學(xué)分析，系統研究了miR-133a表達的調控機制，發(fā)現KAP1相關(guān)的轉錄調控復合物可抑制C2C12成肌細胞中miR-133a的表達；敲低KAP1可增加miR-133a的表達，此過(guò)程伴隨線(xiàn)粒體生物發(fā)生和C2C12成肌細胞分化；miR-133a的上調足以誘導線(xiàn)粒體生物發(fā)生和C2C12成肌細胞分化，而miR-133a抑制劑則顯著(zhù)抑制細胞分化。

該研究*使用CAPTURE技術(shù)鑒定了細胞分化過(guò)程中調控miR-133a表達的重要因子，為理解microRNA的調控機制提供了新思路。

采用Ausbian進(jìn)口特級胎牛血清，透析過(guò)濾去除10000D以下小分子（如次黃嘌呤和胸腺核苷），避免外源小分子對細胞產(chǎn)生干擾。適合脈沖示蹤實(shí)驗（例如同位素標記特定小分子，并加入到培養體系中，以研究細胞代謝），也適合轉染CHO后的篩選等應用。

儲存條件

-20°C凍存。

胎牛血清*解凍后，應按單次習慣用量分裝，分裝后的血清仍-20°C凍存。

若置于4°C的血清，應在一周內用完。

為保證細胞培養的效果，血清和培養基的配置，應遵循“現用現配”原則。配好的培養液，應于一周內用完。

血清避免反復凍融，避免在4°C或更高溫度儲存過(guò)久，否則會(huì )破壞血清中有效活性成分，影響血清品質(zhì)。

血清融化 專(zhuān)業(yè)方法：

目的;更好保留血清中活性成分，使細胞培養更穩定。

推薦血清廠(chǎng)家 專(zhuān)業(yè)融化方法（此方法通用，適用于所有種類(lèi)的血清）：

注意：

♦ 在水浴過(guò)程中，血清的平面要*浸在水中。在融化過(guò)程中要慢慢搖動(dòng)瓶身，使血清混勻，但搖動(dòng)中盡量不要產(chǎn)生泡沫!