400-166-8600
DNA損傷可能發(fā)生在基因組的任何地方，但大多數DNA被包裹在核小體上，這就使得修復復合體無(wú)法進(jìn)入。如今，在一項新的研究中，來(lái)自瑞士弗雷德里希*生物醫學(xué)研究所和巴塞爾大學(xué)等研究機構的研究人員發(fā)現DNA會(huì )誘導組蛋白耗竭，這增加了DNA纖維的可訪(fǎng)問(wèn)性和靈活性，并提高了同源重組修復過(guò)程中的同源搜索速度。相關(guān)研究結果于2020年9月23日在線(xiàn)發(fā)表在Molecular Cell期刊上，論文標題為“DNA Damage-Induced Nucleosome Depletion Enhances Homology Search Independently of Local Break Movement”。論文通訊作者為Susan M.Gasser博士。
幾年來(lái)，Gasser及其研究團隊一直在研究染色質(zhì)結構如何在應對DNA損傷的過(guò)程中發(fā)生變化，以便了解這些變化是否以及如何提高修復速度。在早期的一項研究中，Gasser實(shí)驗室的前博士生Michael Hauer發(fā)現，染色質(zhì)對急性DNA損傷既有局部的反應，也有全基因組范圍內的反應，大約30%的組蛋白在全基因組范圍內被修飾、去除和降解，而且這種現象不僅僅是發(fā)生在損傷部位。這促使染色質(zhì)在細胞核中的移動(dòng)性更強。
論文作者、Gasser實(shí)驗室博士生Anaïs Cheblal在這些發(fā)現的基礎上，探究了這種染色質(zhì)動(dòng)態(tài)和分解的增加是否會(huì )通過(guò)同源重組影響DNA修復機制。
在這項新的研究中，Cheblal及其同事們強調，組蛋白降解和隨后的染色質(zhì)解壓縮（chromatin decompaction）確實(shí)會(huì )提高DNA修復效率和動(dòng)力學(xué)。Cheblal總結了這項研究的主要發(fā)現：“我們發(fā)現，DNA雙鏈斷裂可以通過(guò)組蛋白的受控降解引發(fā)異位的染色質(zhì)解壓縮[指的是在遠處未受損的位點(diǎn)，而非局部]，這對基于同源重組的DNA修復至關(guān)重要。我們還發(fā)現，局部斷裂動(dòng)態(tài)對DNA修復不那么重要，可以通過(guò)增加異位染色質(zhì)移動(dòng)來(lái)加以彌補，而異位染色質(zhì)移動(dòng)與染色質(zhì)解壓縮相關(guān)。此外，我們排除了之前的一個(gè)假設：染色體從核外周脫離是DNA損傷反應的一部分。”
當被問(wèn)及這項研究的更廣泛影響時(shí)，Cheblal說(shuō)，“我們的研究將對CRISPR介導的基因療法至關(guān)重要，目前這種療法的效率太低，無(wú)法用于臨床。我們的研究結果表明將這項技術(shù)與經(jīng)過(guò)適當上調的因子結合起來(lái)誘導組蛋白降解，可能會(huì )提高CRISPR-Cas9的編輯效率。”
通過(guò)同源重組修復DNA是CRISPR-Cas9靶向基因組編輯的基本原理。CRISPR-Cas9編輯技術(shù)主要作為研究工具，但也用于基因治療。初步研究表明，在哺乳動(dòng)物細胞中，隨著(zhù)組蛋白的耗竭，CRISPR-Cas9的編輯效率可以提高。
關(guān)于 牛血清產(chǎn)品 的概述
【牛血清】是細胞培養中重要的天然培養基，含有豐富的細胞生長(cháng)必須的營(yíng)養成份，常用于動(dòng)物細胞的體外培養。
牛血清分為胎牛血清，新生牛血清，小牛血清，成牛血清。
【胎牛血清】（Foetal Bovine Serum，簡(jiǎn)稱(chēng)FBS）：是采自5-8個(gè)月胎齡牛胚胎中的胎血。此時(shí)胎牛各臟器正處生長(cháng)分化階段，血中含有豐富的生長(cháng)發(fā)育因子，非常適合各種細胞的培養，一旦胚胎發(fā)育*這些因子自動(dòng)消失。因此8個(gè)月胎齡以上的牛胚胎，已接近足月，不能作為胎牛血清的原料來(lái)使用。
【新生牛血清】（Newborn Calf Serum，簡(jiǎn)稱(chēng)NBCS）：采自出生一天~一周內的新生牛；
【小牛血清】（Calf Serum）：采自出生10－30天的小牛；
【成牛血清】（Adult Bovine Serum，簡(jiǎn)稱(chēng)ABS）：采自成年牛收全血后分離得到血清。
所有血清出廠(chǎng)前均應經(jīng)過(guò)嚴格質(zhì)控，并附詳細《檢測報告》，
如pH值、滲透壓、內毒素、病毒檢測、促細胞生長(cháng)能力、無(wú)菌等檢查。
其中，由于內毒素直接參與細胞凋亡，對細胞培養結果影響較大，且不同批次的血清，內毒素差異又不易控制。
有下列情況者，對血清內毒素應格外留意篩選：
1.養干細胞時(shí)，干細胞對內毒素非常敏感，如果血清中內毒素≥3EU/ml時(shí)，干細胞很容易死亡。很多使用者，在血清在試用前，就通過(guò)提早審核該批次《檢測報告》，以決定是否入圍進(jìn)行試用。
2.養免疫細胞時(shí)，過(guò)高的內毒素可誘導免疫細胞釋放炎癥因子，抑制小鼠紅細胞集落的形成等。
3.基因敲除相關(guān)的細胞實(shí)驗，培養的細胞要盡可能保持其原始狀態(tài)，任何引導細胞衰老或凋亡的試劑，都會(huì )讓后續的實(shí)驗結果“失之毫厘，謬以千里”。在準備血清和其他試劑時(shí)，選擇極低的內毒素（≤1EU/ml），對實(shí)驗至關(guān)重要；
4.原代培養、雜交瘤融合、細胞轉染，或者肝細胞、神經(jīng)細胞、內皮等難養細胞的擴增，這些都需要挑選好的血清給細胞以有力支持。因此，挑選更低的內毒素，是保證實(shí)驗順利的開(kāi)始。
5.實(shí)驗室有些細胞，需要長(cháng)期培養、長(cháng)期凍存，或者經(jīng)常復蘇、經(jīng)常培養的，血清會(huì )經(jīng)?；蜷L(cháng)時(shí)間作用于細胞。為保證細胞的健康，都應該選用更低內毒素的血清，以避免內毒素長(cháng)久對細胞的毒性影響。
總之，血清中內毒素含量過(guò)高，更容易導致細胞“亞健康”，造成數據不準，或細胞狀態(tài)不良、老化、甚至死亡，導致試驗中斷失敗。血清中的內毒素越低越好。
細胞培養學(xué)會(huì )均依據內毒素對血清的品質(zhì)進(jìn)行分級和命名。
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