您知道細胞培養的無(wú)菌環(huán)境有哪些嗎？

細胞培養是一種無(wú)菌技術(shù)，要求工作環(huán)境和條件必須保證無(wú)微生物和不受其他有害因素的影響。為防止微生物污染和有害因素的影響，細胞培養室要求環(huán)境清潔，空氣清新、干燥、無(wú)塵。

細胞培養實(shí)驗室由無(wú)菌操作區、孵育區、制備區、儲藏區、清洗和消毒滅菌區6部分組成，這些區域的共同特點(diǎn)是房間要寬敞、明亮，地面要便于清潔、防滑，墻壁的質(zhì)地光滑堅硬，儀器設備布局合理，方便操作，避免交叉干擾，陳設簡(jiǎn)潔，便于清掃。

一、無(wú)菌室

無(wú)菌室的結構：一般由更衣間、緩沖間、操作間三部分組成。

無(wú)菌室的消毒和防污染：為保持無(wú)菌狀態(tài)，經(jīng)常消毒是必要的，通常采用每日（使用前）紫外照射（1－2小時(shí)），每周甲醛、乳酸、過(guò)氧乙酸熏蒸（2小時(shí)）和每月新潔爾滅擦拭地面和墻壁一次的方式進(jìn)行消毒。實(shí)際工作中，要根據無(wú)菌室建筑材料的差異來(lái)選擇合適的消毒方法。

此外，還應注意防止無(wú)菌室的污染。造成無(wú)菌室污染的可能包括：送入無(wú)菌室的風(fēng)沒(méi)有被過(guò)濾除菌；進(jìn)出無(wú)菌室時(shí)，能使外界空氣直接對流進(jìn)無(wú)菌室的操作間；等。

二、超凈工作臺

工作原理：鼓風(fēng)機驅動(dòng)空氣通過(guò)高效過(guò)濾器得以?xún)艋?，凈化的空氣被徐徐吹過(guò)臺面空間而將其中的塵埃、細菌甚至病毒顆粒帶走，使工作區構成無(wú)菌環(huán)境。根據氣流在超凈工作臺的流動(dòng)方向不同，可將超凈工作臺分為側流式、直流式和外流式三種類(lèi)型。

超凈臺的使用與保養：超凈臺的平均風(fēng)速保持在0.32-0.48米/秒為宜，過(guò)大、過(guò)小均不利于保持凈化度；使用前最好開(kāi)啟超凈臺內紫外燈照射10－30分鐘，然后讓超凈臺預工作10－15分鐘，以除去臭氧和使用工作臺面空間呈凈化狀態(tài)；使用完畢后，要用70%酒精將臺面和臺內四周擦拭干凈，以保證超凈臺無(wú)菌。還要定期用福爾馬林熏蒸超凈臺。

德國MB生產(chǎn)的Mycoplasma-offTM噴霧劑，或濕巾擦拭 5-10分鐘清除，對支原體、細菌、真菌、霉菌、孢子祛除確切有效。無(wú)殘留, 無(wú)腐蝕, 無(wú)致癌性，操作簡(jiǎn)單方便。

qPCR法介紹：

熒光定量PCR法（qPCR）：是在常規PCR基礎上，將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標記，使PCR擴增后的產(chǎn)物帶有熒光，利用熒光信號的變化和配套軟件，進(jìn)行DNA擴增反應的實(shí)時(shí)監測，簡(jiǎn)稱(chēng)qPCR。

優(yōu)點(diǎn)：①靈敏度高、特異性強。

②時(shí)間短，2-3小時(shí)出結果。

③檢測結果可定量。

④操作簡(jiǎn)便。

缺點(diǎn)：①對于已做支原體滅活處理的樣品，由于支原體DNA仍舊存在其中，PCR結果會(huì )出現假陽(yáng)性。（可用培養法做補充驗證）

②不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大（由于引物及內在設計不同），需謹慎選擇，盡量在專(zhuān)業(yè)人員推薦指導下使用