貼壁細胞如何高效傳代？

細胞培養的本質(zhì)是細胞克隆技術(shù)。原理就是盡可能給細胞提供類(lèi)似于體內的環(huán)境，在無(wú)菌條件下，給予適當的溫度和酸堿度以及細胞生長(cháng)繁殖所必要的營(yíng)養條件，使其能在體外維持正常的生長(cháng)繁殖，并保持其結構和功能的技術(shù)。

細胞培養技術(shù)的應用十分廣泛，基礎醫學(xué)研究，抗體制備，新藥篩選，基因工程等等都需要用到細胞培養技術(shù)。

貼壁細胞如何高效傳代？

貼壁生長(cháng)的細胞，在培養瓶或者培養皿長(cháng)至單層鋪滿(mǎn)的狀態(tài)后后，空間已基本上飽和，細胞生長(cháng)、增殖受阻，為使其繼續擴增或生長(cháng)，需要進(jìn)行傳代（再培養）處理。同時(shí)，傳代培養也可用于細胞種的保存。不僅如此，各種細胞實(shí)驗也是以高效的細胞傳代為基礎的。

懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞則需經(jīng)消化等處理后才能分瓶。

一般使用胰蛋白酶，將貼壁細胞消化成成單個(gè)細胞，也可加入EDTA提高消化能力（EDTA 是一種二價(jià)離子的螯合劑，能抑制細胞膜上的Ca2+和Mg2+）。

常用的細胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA。

實(shí)驗時(shí)，先用吸去細胞培養上清，用PBS清洗細胞，棄掉洗滌液，重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(根據培養皿的大小不同，一般2-5ml消化液即可，以剛好鋪滿(mǎn)整個(gè)皿底為原則)，觀(guān)察細胞直到細胞變圓脫離瓶壁，此過(guò)程一般需要3-5分鐘，為了避免細胞成團，消化細胞的過(guò)程中不要拍打細胞瓶。對于特別難消化的細胞，可以加入胰酶EDTA 消化液后把細胞置于37°C 促進(jìn)消化，細胞脫離瓶壁后，立刻加入含有血清的*培養基中止消化。

800-1000rpm，離心5分鐘，然后棄去中止用的培養基，加入適合的新的培養基輕輕混勻細胞，移入到新的培養瓶。傳代的比例視細胞類(lèi)型而定。胰蛋白酶會(huì )對某些細胞的細胞膜產(chǎn)生損傷，對于這種類(lèi)型的細胞，可用細胞刮輕輕刮下細胞，加入適量的培養基，輕輕吹打混勻細胞，然后進(jìn)行傳代培養。

WHO公布的《用動(dòng)物細胞體外培養生產(chǎn)生物制品規程》中的要求：

1、牛血清必須來(lái)自有文件證明無(wú)牛海綿狀腦病的牛群或國家，并應具備適當的監測系統。

2、有些國家還要求牛血清來(lái)自未用過(guò)反芻動(dòng)物蛋白飼料的牛群。

3、證明所用牛血清中不含對所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。

4、血清要通過(guò)濾膜過(guò)濾除菌，保證無(wú)菌。

5、無(wú)細菌、霉菌、支原體和病毒的污染，有些國家要求無(wú)細菌噬菌體污染。

6、對細胞有良好的支持繁殖作用。

我國對牛血清的質(zhì)量中提出比較嚴格的標準要求：

包括蛋白質(zhì)含量，細菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細菌內毒素，支持細胞增殖檢查。一款來(lái)自澳洲的Ausbian®胎牛血清在市場(chǎng)上頗受歡迎。它具有精選內毒素極低、產(chǎn)量充足的血清批次，滿(mǎn)足干細胞、基因敲除、原代培養、細胞典藏、長(cháng)期傳代等各類(lèi)細胞的培養要求；澳洲血源，完整的檢測報告及滅病毒服務(wù)，為各類(lèi)臨床相關(guān)項目的申報提供完整支持等特點(diǎn)。