細胞培養中如何防止黑點(diǎn)生成及如何儲存血清？

胎牛血清是指懷孕5-8個(gè)月的母牛被屠宰后，發(fā)育未完quan的胎牛心臟穿刺采血后，通過(guò)一系列工藝處理最終獲得。此時(shí)胎牛血中含有特殊的生長(cháng)發(fā)育因子，一旦胚胎發(fā)育完quan這些因子自動(dòng)消失。那么，面對如此珍貴的胎牛血清，實(shí)驗人該如何防治黑點(diǎn)生成、如何儲存使用血清呢？

1、 細胞培養中如何防止黑點(diǎn)生成？

答：（1） 盡可能地減少血清凍融次數。

（2） 培養基無(wú)需37℃水浴。

（3） 培養基保持最佳PH值7.0- 7.2。

（4） 嚴格控制配制培養基的水質(zhì)，容器定期刷洗。

（5） 掌握細胞傳代的最佳時(shí)機，細胞切勿生長(cháng)過(guò)老。

2、如何儲存使用血清？

答：儲存條件：血清一般儲存于－20℃，同時(shí)應避免反復凍融。購買(mǎi)大包裝的血清后，需要分裝成小包裝，儲存于－20℃，使用前融化。關(guān)于血清融化，我們推薦以三步來(lái)進(jìn)行（詳細可參閱《關(guān)于胎牛血清知識問(wèn)答（一）》）。例如，500ml的胎牛血清，首先在室溫條件下放置90min，然后再20℃水浴放置25min，最后在37℃水浴放置35分鐘即可。

使用濃度：自從有了合成培養基，血清就是作為一種添加成分與合成培養基混合使用，使用濃度一般為5－20％，常用是10％。過(guò)多血清容易使培養中的細胞發(fā)生變化，特別是一些二倍體的無(wú)限細胞系，迅速生長(cháng)之后容易發(fā)生惡性轉化。

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