為何血清使用效果千差萬(wàn)別？

「剛買(mǎi)來(lái)的細胞，前幾代養著(zhù)還行，這越養怎么狀態(tài)越差？后面的實(shí)驗可怎么辦？」

經(jīng)?！革曫B」細胞的小伙伴，應該都遇到或聽(tīng)說(shuō)過(guò)上述這些情況。影響細胞狀態(tài)的潛在因素有很多，血清就是其中之一。

血清對于細胞實(shí)驗的重要性毋庸置疑：提供細胞生長(cháng)增殖所需的營(yíng)養物質(zhì)、提供結合蛋白、幫助細胞貼壁、提供蛋白酶抑制劑、調節培養體系理化特性等等功能。因此，可以這樣認為：血清品質(zhì)的優(yōu)劣，一定程度上決定了細胞生長(cháng)狀態(tài)的好壞。

很多從業(yè)者在挑選血清的時(shí)候，只關(guān)注到品牌、產(chǎn)地，甚至會(huì )哪家打折買(mǎi)哪家，忽略了血清的檢測指標、批次以及解凍儲存情況。那么，這些細節究竟有何玄ji？本期內容，我們將目光鎖定在這三個(gè)方面，揭秘其在細胞培養過(guò)程中，導致血清使用效果出現差異的原因，希望可以給各位從事細胞培養相關(guān)工作的小伙伴，提供幫助！

一、檢測指標

血清對于細胞培養很重要，要保證血清質(zhì)量，需要有嚴格的質(zhì)控，包括從外觀(guān)到理化性質(zhì)、細胞增殖試驗和微生物檢查，制定一系列的標準，以及出廠(chǎng)產(chǎn)品能符合這些標準。

以胎牛血清為例，優(yōu)質(zhì)的特級胎牛血清，外觀(guān)應是淡棕色至橙色透明液體，無(wú)顆粒物沉淀；PH 在 6.7-8.2 之間；滲透壓在 260-340mosm/kg 之間；血紅蛋白含量小于 20 mg/dL；總蛋白含量在 30-50 g/L；白蛋白含量在 14-34 g/L；α、β、γ 球蛋白含量則以實(shí)際測量為準；IgG 應小于 250 μg/mL；內毒素含量應小于 10EU/mL。

這些指標直接關(guān)系到所培養細胞質(zhì)量的高低。其中的典型代表就是內毒素。健康的胎牛血本身是不含有內毒素的，但是由于采集過(guò)程，運輸環(huán)境，生產(chǎn)工藝等多種因素，商業(yè)化的成品胎牛血清不可避免地會(huì )檢出內毒素。我們都知道，內毒素參與細胞的衰老、凋亡等進(jìn)程。長(cháng)期用內毒素含量高的血清培養細胞，更容易影響細胞正常的生理生化功能，令細胞不知不覺(jué)進(jìn)入「亞健康」的狀態(tài)。細胞健康，實(shí)驗結果才能更準確；細胞「萎靡不振」，實(shí)驗結果也容易隨之產(chǎn)生偏差。

因此，在挑選血清、查看檢測報告的時(shí)候，應重點(diǎn)關(guān)注內毒素這一項，選擇內毒素含量低的血清。以 Ausbian 特級胎牛血清為例：經(jīng)過(guò)檢測，其內毒素含量穩定小于 3EU/mL，一些批次甚至小于 1.0 EU/mL！「飲食干凈」，細胞狀態(tài)更健康！

二、血清批次

每年全球產(chǎn)的胎牛血清的總量是有限的。正常情況下，胎牛血清是通過(guò)剖腹產(chǎn) 5-8 月齡的牛胚胎，采用心臟穿刺采血的方式，經(jīng)一系列加工處理后得到的。一次采血最多也就 1 到 2 瓶胎牛血清，所以它本身就要比其他血清更為稀少珍貴。

再大的血清制造商，每一批的血清產(chǎn)量都是有限的。不同飼養條件下、不同品種，相同流水線(xiàn)上操作的不同員工，都會(huì )導致同一品牌不同批次的血清略有差別。不同批號的血清在同一個(gè)實(shí)驗中混用，很難保證細胞不會(huì )因為「飲食」改變而耍耍實(shí)驗數據不穩定這樣的「小脾氣」。

那么，該怎樣解決這一難題？每次換血清都從頭驗證？還是和之前的血清混合使用？最行之有效的方法，就挑選一個(gè)安全可靠、貨源充足、產(chǎn)品可溯源的品牌！

Ausbian 特級胎牛血清，近二十年服務(wù)過(guò)千萬(wàn)細胞培養用戶(hù)，澳洲血源，供貨穩定，每個(gè)批次產(chǎn)量 800-2000 升，保證大多數項目?jì)赡瓴恍钃Q批次。不僅如此，Ausbian 特級胎牛血清可提供多批次平行供應，會(huì )根據用戶(hù)的不同需求，挑選符合實(shí)驗需求的血清，盡可能減少血清因批次不同而產(chǎn)生的實(shí)驗誤差。

三、血清的解凍與儲存

剛到貨的血清應該怎樣儲存？血清到底要怎樣解凍才能保證活性？血清在 4℃ 冰箱能放多久？這些細節也會(huì )影響血清的使用效果。

常規儲存

首先，剛到貨的血清，趁著(zhù)它還未融化，趕緊放進(jìn)-20℃ 冰箱中，避免反復凍融。當然，如果你的課題組不差錢(qián)，-80℃ 冰箱空間充足，把血清儲存進(jìn)去也是沒(méi)有問(wèn)題的。

再來(lái)說(shuō)說(shuō)血清的解凍。很多從業(yè)者都習慣將血清從-20℃/-80℃ 取出后，直接丟在 4℃ 冰箱甚至是室溫環(huán)境下過(guò)夜解凍。這種方法雖然看似方便省心，實(shí)則有一定的潛在風(fēng)險。

科學(xué)解凍

我們都知道，在血清這種混合物中，融化速度：蛋白質(zhì)等干物質(zhì) > 水這類(lèi)溶劑，所以蛋白質(zhì)會(huì )率xian溶解析出，而水還是結成冰的狀態(tài)，導致瓶子中間會(huì )出現一根透明的冰柱，而周?chē)鷦t會(huì )呈現上黃下紅的分層渾濁液的狀態(tài)，在使用過(guò)程中很容易引起沉淀、混合不均勻、局部濃度過(guò)高等問(wèn)題，影響細胞生長(cháng)。

更重要的一點(diǎn)是，血清中珍貴的生長(cháng)因子等活性物質(zhì)，它們在解凍過(guò)程中，有著(zhù)與細胞復蘇類(lèi)似的經(jīng)歷，都需要快速解凍才能盡可能保留生物活性。顯然，4℃ 過(guò)夜這樣的長(cháng)時(shí)間處理，很有可能會(huì )導致一部分「營(yíng)養成分」的損失，影響細胞生長(cháng)。

所以，為了更好地保留血清中的活性成分，使細胞培養更穩定，我們推薦使用三步法溶解。如果是儲存在-80℃ 的血清，則需提前幾天先轉移至-20℃ 冰箱中（至少 24 小時(shí)），再使用三步法溶解，避免溫差過(guò)大使血清失活。

需要特別提醒的是，此方法國際通用，適用于所有培養基，在水浴過(guò)程中，血清的平面要浸在水中。在融化過(guò)程中要慢慢搖動(dòng)瓶身，使血清混勻，但搖動(dòng)中盡量不要產(chǎn)生泡沫！

解凍血清后，可以根據實(shí)驗需求，將其分裝，保證每一份夠一次使用量即可，比如：25 ml/管、50 ml/管等。密封好后趕緊放回-20℃ 冰箱繼續儲存。需要配制培養基的時(shí)候，再從-20℃ 冰箱中取出一管來(lái)解凍使用（最好能全部配成培養基，不要有剩余），可以有效避免反復凍融的問(wèn)題（遵循現用現配、現配現解凍的原則）。配好的培養基可以放到 4℃ 冰箱進(jìn)行儲存。

4℃ 存放時(shí)間

看到這里，問(wèn)題又來(lái)了，配好的培養基，或者剩下的那一點(diǎn)點(diǎn)血清，能在 4℃ 冰箱里放多久呢？先給出我們認為比較合理的答案，再來(lái)解釋原因：7 天

一般情況下，已經(jīng)解凍的血清，無(wú)論是配成完quan培養基還是在冰箱里備用，都不要超過(guò)一周（7 天），原因也很簡(jiǎn)單，存放太久，生長(cháng)因子等物質(zhì)容易失活，而且比較容易受到污染，影響實(shí)驗結果。

其實(shí)，無(wú)論是日常使用，還是銷(xiāo)售運輸過(guò)程中，血清都忌諱反復凍融，不僅容易析出沉淀，造成細胞污染的假象，給實(shí)驗人員造成比不要的困擾，而且在一些對營(yíng)養需求比較特殊的細胞而言，反復凍融析出大量沉淀的血清，可能不足以供給其營(yíng)養，導致細胞出現生長(cháng)不良等狀況。

因此，選擇一款運輸途中儲存條件有保障的血清，至關(guān)重要。Ausbian 特級胎牛血清及其同系列血清產(chǎn)品，出廠(chǎng)后，全程冷鏈運輸，對反復凍融 Say No！

綜上所述，想要保證細胞狀態(tài)、實(shí)驗數據的穩定，一款優(yōu)質(zhì)的血清不可少。Ausbian 特級胎牛血清就是這樣一個(gè)令人安心的選擇。

在血源的控制上十分嚴格：Ausbian 特級胎牛血清為澳洲血源，優(yōu)中選優(yōu)，精選當地政府獸醫部門(mén)的監督下從注冊的出口屠場(chǎng)采集，符合國際動(dòng)物協(xié)會(huì )要求，并且嚴格控制采血時(shí)間為 5-8 月齡的牛胚胎，盡可能保留各類(lèi)生長(cháng)因子，并且避免了完整的補體系統對細胞的影響，無(wú)需熱滅活，出廠(chǎng)后全程冷鏈運輸，避免反復凍融！

在生產(chǎn)工藝、質(zhì)量檢測、批次控制上嚴格把關(guān)，做到保證同一批次血清產(chǎn)量充足的同時(shí)，質(zhì)量上基本無(wú)差異：將經(jīng)過(guò)初步檢測合格的很多供體胎牛的粗血清，混合在一起，在低溫條件下，經(jīng)七次加壓過(guò)濾，最后三次為 0.1 µm 無(wú)菌過(guò)濾處理，再經(jīng)后續的一系列無(wú)菌操作，最終得到優(yōu)質(zhì)的 Ausbian 特級胎牛血清。所有血清出廠(chǎng)前，均經(jīng)過(guò)嚴格質(zhì)控，每個(gè)批次附有詳細完整的《檢測報告》。針對特殊科研項目，更可提供 3-5 個(gè)平行批次，讓實(shí)驗者有更多選擇空間。

Ausbian 特級胎牛血清，內毒素更低，讓細胞在健康的環(huán)境中生長(cháng)：精選內毒素更低批次，內毒素 ≤ 3EU/mL，有些甚至低于 1EU/mL，深受眾多科研用戶(hù)的喜愛(ài)，也是是細胞典藏等重大項目十幾年的穩定供應品牌。

除了上述產(chǎn)品優(yōu)勢，更有安心的售前售后服務(wù)提供給各位 Ausbian 用戶(hù)：貼心的試用服務(wù)，試用滿(mǎn)意的批號可以?xún)?yōu)先鎖定；每年按廠(chǎng)家生產(chǎn)順序，會(huì )有多批次平行供應，每個(gè)實(shí)驗室專(zhuān)屬批號；為 Ausbian 血清用戶(hù)免費提供申報支持，具有完整的檢測報告，為各類(lèi)項目的申報提供支持；為 Ausbian 血清提供免費代儲存服務(wù)，按要求隨時(shí)發(fā)貨；所有實(shí)驗室簽收的 Ausbian 胎牛血清，從簽收日開(kāi)始計算，一年之內，血清在妥善保管、未開(kāi)封未融化、且不影響二次銷(xiāo)售的情況下，均可享受無(wú)條件退貨或換貨的售后保障；免費專(zhuān)業(yè)幫助，匯集近二十年，千萬(wàn)個(gè)血清用戶(hù)細胞培養經(jīng)驗，為各種細胞培養提供問(wèn)題梳理分析，解決方案參考。Ausbian 品牌擁有全系列血清產(chǎn)品線(xiàn)：特級胎牛血清、細胞治療專(zhuān)用胎牛血清、透析胎牛血清、馬血清等多系列產(chǎn)品，服務(wù)更專(zhuān)業(yè)更精準。