「細胞質(zhì)控」助力高質(zhì)量細胞培養

人有生老病死，細胞也是如此。在細胞體外培養過(guò)程中，細胞的活力和狀態(tài)是處于一種動(dòng)態(tài)變化的狀態(tài)。

脫離機體保護的細胞，往往是很脆弱的，在體外環(huán)境中生長(cháng)，培養條件的輕微改變，或許就會(huì )令細胞發(fā)生不可預估的變化。就比如，常見(jiàn)的原代細胞培養過(guò)程中，即使保持培養條件并未發(fā)生改變，但在傳代過(guò)程中，細胞質(zhì)量也經(jīng)常是呈下降趨勢的。

細胞質(zhì)量改變，勢必會(huì )影響實(shí)驗結果。因此，對細胞質(zhì)量進(jìn)行適當的監控，有助于掌握細胞狀態(tài)，對其能否進(jìn)行后續實(shí)驗做出合理的預判。

細胞質(zhì)控

傳統的細胞培養，主要是通過(guò)在顯微鏡下，觀(guān)察細胞的形態(tài)學(xué)變化，以及傳代培養周期的變化，來(lái)判斷細胞狀態(tài)。這種判斷方法雖然便捷，但是由于比較主觀(guān)，誤差較大，也無(wú)法量化，或是進(jìn)行統計學(xué)分析。

體外細胞的有效培養新概念——“細胞質(zhì)控"。

可以通過(guò)細胞活力、細胞凋亡、細胞周期、細胞增殖及DNA損傷等五方面對細胞生長(cháng)生存狀態(tài)進(jìn)行全面的監控。

在體外細胞培養的過(guò)程中，細胞總有一些因各種原因而死亡，總細胞中活細胞所占的百分比，即是我們常說(shuō)的細胞活力。

是“細胞質(zhì)控"中比較基礎的指標。常見(jiàn)的流式細胞設備及部分細胞計數儀器都可以對細胞進(jìn)行計數，也可以提供準確客觀(guān)的細胞活力數據，為“細胞質(zhì)控"提供準確、客觀(guān)的統計學(xué)依據。

細胞活力檢測注意事項

檢測細胞活力時(shí)，需保證正常細胞的細胞膜是完整的。

核酸染料，如PI（Propidium iodide，碘化丙啶）常用于流式細胞儀分析。細胞在處于壞死或即將死亡的細胞細胞膜常處于受損狀態(tài)，由于PI不能通過(guò)正常完整的細胞膜，因此，細胞活力不佳的細胞，PI可將其染成紅色，用于分辨壞死細胞/正常細胞。

如果染色時(shí)再加入另一種能夠通過(guò)細胞膜的核酸染料，就可以將活細胞和死細胞區分開(kāi)。

例如，PI經(jīng)常被用來(lái)與Calcein-AM或者FDA等熒光探針一起使用，區別活力不同細胞。

細胞活力檢測的其他應用

除了對細胞進(jìn)行常規的質(zhì)量檢測，細胞活力測定還有其他更廣泛的應用。

例如，細胞活力是細胞毒性實(shí)驗的指標之一。判斷某種外源成分（化合物、小分子藥物或蛋白質(zhì)等）對細胞是否存在毒性或毒性的高低，首先要觀(guān)察的，就是該成份是否會(huì )誘導細胞死亡，也就是細胞活力的變化。

另外，除了細胞毒性研究，細胞質(zhì)控在病毒感染或者RNA轉染的研究中發(fā)揮著(zhù)重要作用。轉染/感染所用的試劑，或多或少會(huì )對細胞產(chǎn)生一定的負面影響。因此，在轉染之前，活細胞需要達到一定的比例才可以保證在轉染實(shí)驗的順利進(jìn)行。

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• 提供結合蛋白，能識別維生素、脂類(lèi)、金屬和其他激素等，能結合或調節它們所結合的物質(zhì)活力。

• 有些情況下結合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結合，起到解毒作用。

• 是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質(zhì)上所需因子來(lái)源。

• 起酸堿度緩沖液作用。

• 提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活，保護細胞不受傷害。

• 參與細胞凍存。

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