用于「細胞和生物制品」及其生產(chǎn)過(guò)程中「支原體」污染的檢測

支原體qPCR法介紹：

熒光定量PCR法（qPCR）：是在常規PCR基礎上，將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標記，使PCR擴增后的產(chǎn)物帶有熒光，利用熒光信號的變化和配套軟件，進(jìn)行DNA擴增反應的實(shí)時(shí)監測，簡(jiǎn)稱(chēng)qPCR。

優(yōu)點(diǎn)：

①靈敏度高、特異性強。

②時(shí)間短，2-3小時(shí)出結果

③檢測結果可定量

④操作簡(jiǎn)便

缺點(diǎn)：

①對于已做支原體滅活處理的樣品，由于支原體DNA仍舊存在其中，PCR結果會(huì )出現假陽(yáng)性。（可用培養法做補充驗證）

②不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大（由于引物及內在設計不同），需謹慎選擇，盡量在專(zhuān)業(yè)人員推薦指導下使用。

『支原體qPCR檢測試劑盒』介紹

德國MB公司生產(chǎn)的支原體qPCR檢測試劑盒（均為探針?lè )z測），依據操作步驟的細微差別， 分『經(jīng)典法』和『一步法』兩種。

此兩類(lèi)試劑盒較其他廠(chǎng)家同類(lèi)產(chǎn)品，具有以下的優(yōu)點(diǎn)：

①經(jīng)典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求

②高特異性，一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規定的9種支原體），根據序列一致性，至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡(jiǎn)單，易于觀(guān)察。（使用MB的試劑盒，下表中列出的支原體物種均為陽(yáng)性，其他微生物或真核細胞均為陰性，無(wú)交叉反應）

③高靈敏度，MB公司的經(jīng)典法試劑盒zui低檢測限可達到≤10CFU/ml。

MB公司的一步法qPCR試劑盒zui低檢測限≥50個(gè)基因組/反應。

④MB公司有相應配套的10CFU/100CFU的敏感度測試的標準品，便于方法學(xué)驗證。

⑤MB公司有相應配套的支原體基因組DNA和細菌基因組DNA，便于特異性驗證。

⑥MB公司有相應配套的支原體絕對定量標準品，便于最后定量檢測。