如何高效培養細胞——無(wú)菌環(huán)境的控制

常見(jiàn)的細胞培養物污染主要分為化學(xué)污染與生物污染。

生物污染

細菌污染：

在生物污染中，細菌污染更為常見(jiàn)。特點(diǎn)就是：發(fā)生迅速、容易觀(guān)察。一般發(fā)生細菌污染后幾天內，就能肉眼觀(guān)察到；可肉眼觀(guān)察到培養物變渾濁，有時(shí)可觀(guān)察到明顯顆粒物，液體表面可能會(huì )形成一層薄膜。

真菌污染：

酵母菌、霉菌是真菌污染中常見(jiàn)的兩類(lèi)。污染初期，培養基pH均不會(huì )有明顯變化，后期會(huì )伴隨pH的升高，培養物會(huì )變得混濁，顯微鏡下觀(guān)察，酵母菌污染會(huì )有橢球形或球形顆粒，而霉菌污染則能看到明顯菌絲。

支原體污染：

支原體非常小，光學(xué)顯微鏡下難以檢測，污染前期也很難看到明顯現象。當支原體密度高到一定程度后，會(huì )導致細胞培養物“變質(zhì)"：pH驟變引起培養基快速變黃等。一些生長(cháng)緩慢的支原體可在培養物中持續存活，而不會(huì )導致細胞死亡，但支原體污染的細胞，通常行為和代謝都會(huì )發(fā)生改變，進(jìn)而影響實(shí)驗結果。

病毒污染：

病毒可以利用宿主細胞的結構進(jìn)行繁殖。體積小，檢測及祛除的難度都比較大。雖然大多數病毒對宿主的要求都比較嚴格，通常不會(huì )對宿主以外物種及細胞培養物產(chǎn)生不良影響，但對被病毒感染的細胞本身會(huì )產(chǎn)生比較大的威脅。因此，實(shí)驗時(shí)，要選擇來(lái)源正規的細胞株，實(shí)驗操作過(guò)程中，也要注意無(wú)菌操作，預防污染。

細胞交叉污染

不同細胞共同培養在一個(gè)培養皿內，就會(huì )形成交叉污染。需要通過(guò)合格的細胞購買(mǎi)渠道，以及嚴格規范的操作流程規避該問(wèn)題。

化學(xué)污染

一些外源化學(xué)物質(zhì)，如：用過(guò)的器具未清洗干凈，使用的添加劑純度不達標等等。都會(huì )對細胞產(chǎn)生或大或小的影響，此類(lèi)影響可能抑制細胞生長(cháng)，也可能加速細胞生長(cháng)，但這些都是不可控的。

因此，在挑選試劑時(shí)，要購買(mǎi)在正規產(chǎn)品，盡量使用一次性滅菌器具，注意實(shí)驗操作規范。

創(chuàng )造無(wú)菌培養環(huán)境

細胞一旦發(fā)生污染，多數情況下都不可再繼續使用，即便是使用祛除試劑，也會(huì )造成不可避免的經(jīng)濟成本和時(shí)間成本。

因此，為細胞創(chuàng )造一個(gè)無(wú)菌環(huán)境就顯得尤為重要。對于環(huán)境的清潔、消毒、滅菌，以高效、便捷、安全為基本原則。

日常清潔可選用新捷爾滅這類(lèi)試劑，定期（每周1-2次）對細胞培養室的墻壁、桌面、地面進(jìn)行噴灑、擦拭處理，同時(shí)對細胞培養房間專(zhuān)用的實(shí)驗服等物品進(jìn)行清洗、滅菌處理。

除此之外，推薦使用支原體祛除試劑，對實(shí)驗室環(huán)境進(jìn)行定期維護。

產(chǎn)品特點(diǎn)

（1）快速有效

噴霧劑中含有支原體專(zhuān)用殺除劑Mynox®，可在幾分鐘內迅速殺除支原體。

（2）廣譜抗菌

不僅能祛除支原體，而且能有效祛除葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、鼠諾如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等。

（3）無(wú)腐蝕性和致癌性

乙醇作為溶劑，無(wú)腐蝕性和致癌性成分

（4）操作簡(jiǎn)便

即用型消毒液，可以快速簡(jiǎn)單地保持工作區的清潔干凈