動(dòng)物細胞體外培養技術(shù)的發(fā)展,很大程度上推進(jìn)了現代生物醫學(xué)與醫藥相關(guān)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。細胞培養該技術(shù)被廣泛應用于單克隆抗體的制備、重組蛋白藥物的研發(fā)等行業(yè),成為生物制藥領(lǐng)域的基礎且關(guān)鍵技術(shù)之一。
合格的胎牛血清,采自5-8月齡的牛胚胎。含有多種生長(cháng)因子和細胞因子,可在一定程度上模擬細胞增殖和維持的過(guò)程。胎牛血清還含有大量的蛋白成分,其中主要的蛋白成分有白蛋白、A1抗胰蛋白酶、轉鐵蛋白、Ig類(lèi)抗體,還有含量不等的脂蛋白、膽固醇、纖維結合蛋白、膽紅素和類(lèi)胡蘿卜素等多種成分。
胎牛血清在細胞培養過(guò)程中,可以終止胰蛋白酶消化、提供細胞生長(cháng)所需的貼壁因子、免疫球蛋白、胰島素等其它營(yíng)養成分及細胞因子。因此胎牛血清成為體外細胞培養體系中常用添加成分,為細胞生長(cháng)和維持提供了必要的活性成分。
胎牛血清中胎球蛋白A(fetuin-A)等成分的差異在培養細胞粘附中已發(fā)揮重要作用。研究表明,細胞通過(guò)其粘附蛋白包括纖維連接蛋白(Fibronectin,Fn)和體外連接蛋白(Vitronectin,Vn)吸附在人工材料的培養皿上。
研究表明,在含FBS培養基中培養的間充質(zhì)干細胞(MSC),含有較高的穩定細胞粘附相關(guān)的β-肌動(dòng)蛋白和整合素β-1 (ITGβ1)的基因表達水平,并且隨著(zhù)細胞密度的增加而增加。細胞微環(huán)境以多因子(趨化因子、細胞外基質(zhì))協(xié)同的方式對細胞粘附與遷移進(jìn)行調控。
而胎牛血清以及高分子材料的細胞培養裝置,會(huì )對細胞的微環(huán)境產(chǎn)生一定的影響。當細胞粘附在基底上時(shí),細胞骨架會(huì )通過(guò)整合素(Integrin)與基底進(jìn)行連接,并通過(guò)粘著(zhù)斑將肌動(dòng)蛋白和肌球蛋白II產(chǎn)生的力學(xué)刺激傳遞給細胞外基質(zhì)。
胎牛血清在細胞粘附因子的成分上有所差異,可能由于不同細胞粘附因子的組成與細胞培養容器表面分子發(fā)生相互作用,導致細胞生長(cháng)速度和活力的差異。
胎牛血清的選擇
結合前文所述,胎牛血清的品質(zhì)高低,直接關(guān)系到細胞培養過(guò)程中細胞貼壁等狀態(tài)的好壞。另外,有研究表明,高溫、反復凍融等狀況,都會(huì )使粘附因子有一定損失。
因此,選擇一款合格的胎牛血清,對于細胞培養而言至關(guān)重要。
胎牛血的采血時(shí)間要嚴格控制在5-8月齡,保證營(yíng)養成分的豐富度。
胎牛血清出廠(chǎng)前需要經(jīng)過(guò)嚴格的質(zhì)量檢測。
胎牛血清運輸過(guò)程中,盡可能保證全程冷鏈運輸。