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警惕!細胞培養中的支原體污染!

更新時(shí)間:2023-03-11  |  點(diǎn)擊率:429

細胞培養技術(shù),對于實(shí)驗環(huán)境的潔凈度有嚴格的要求。不僅要對細胞實(shí)驗用的基礎設施進(jìn)行維護,還要定期對環(huán)境進(jìn)行清潔,防止細胞被真菌、細菌、支原體等微生物污染。


我們反復強調要避免細胞的支原體污染。那么,支原體對于細胞培養而言,究竟有何種危害?本期內容,為大家介紹支原體污染的危害。

支原體發(fā)現于1898年。自1956年Robinson從細胞培養物中分離出支原體后, 國內外關(guān)于支原體污染細胞的報道便層出不窮。支原體廣泛存在于自然界中, 有80余種。


支原體 (Mycoplamsa) 又稱(chēng)霉形體,歸屬于柔膜體綱 (Mollicutes) ,共有6個(gè)屬,120個(gè)種別。支原體沒(méi)有細胞壁,不能維持固定的形態(tài)而呈現多形性。


對支原體進(jìn)行革蘭染色為陰性。不僅如此,支原體對青霉素這類(lèi)干擾細胞壁合成的抗生素,具有天然抗性。


支原體通常附著(zhù)在細胞的表面, 并影響其宿主細胞的生理、遺傳等多方面的正常功能, 用這些污染后貌似正常的細胞做試驗或生產(chǎn), 將會(huì )嚴重影響結果。


1、影響細胞的生長(cháng)繁殖及形態(tài)


細胞培養物遭受到支原體污染后,會(huì )出現生長(cháng)減慢,細胞病變等情況。


具體表現為以下幾點(diǎn):


不僅如此,某些支原體還可在侵入細胞8小時(shí)內,使線(xiàn)粒體膨脹,繼而被破壞,細胞核呈空泡化,細胞微管解聚,培養瓶中細胞與細胞間隙出現膜狀沉積,細胞無(wú)法傳代,甚至整個(gè)細胞群體溶解。

2、代謝和功能


支原體污染細胞的情況,在形態(tài)上變化不明顯。但需要注意的是,細胞培養基的pH值,會(huì )有比較大的變化。更換培養液后幾小時(shí)就變酸,培養基中的必需氨基酸被消耗掉,進(jìn)而改變細胞代謝。


支原體對細胞代謝和功能的影響,具體體現在以下幾個(gè)方面:


有研究表明,在單克隆抗體制備中,骨髓瘤或雜交瘤細胞因支原體的污染而導致融合失敗或抗體分泌能力下降以至喪失。


3

引起染色體異常


改變染色體組型,通??蓪е录毎旧w斷裂、數目減少,出現雙著(zhù)絲點(diǎn)染色體、環(huán)狀染色體等。


4、影響免疫細胞產(chǎn)量


對于巨噬細胞的培養體系,支原體會(huì )抑制干擾素的合成和降低其活性,加大了繼發(fā)感染其他細菌和病毒的幾率。也有研究表明,支原體可以通過(guò)植物血凝素,干擾淋巴細胞的刺激和分化。


為了盡可能降低細胞污染支原體的風(fēng)險,應定期對實(shí)驗環(huán)境進(jìn)行清潔。


德國MB公司的支原體祛除噴霧劑——Mycoplasma-off™,含有針對支原體的殺除劑Mynox®,可在幾分鐘內迅速殺除支原體。


不僅對支原體有效,而且能祛除葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、鼠諾如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等微生物。


乙醇作為溶劑,無(wú)腐蝕性和致癌性成分。即用型消毒液,可以快速簡(jiǎn)單地保持工作區的清潔干凈。
對于培養箱水槽、水浴鍋這類(lèi)衛生死角,也應提高警惕。德國MB公司的水槽支原體預防試劑——Water Shield™,含表面活性劑、季銨鹽和絡(luò )合劑,不易揮發(fā),可持續作用4周,按1:200比例,直接加入水中,不含醛類(lèi)或疊氮化物,對細胞無(wú)毒害,但能有效預防支原體、細菌、真菌、等微生物污染 。
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