搞定細胞中的支原體，看這篇就夠了！

支原體污染解決方案

支原體污染在世界范圍內的細胞實(shí)驗室中，屬于比較常見(jiàn)的一類(lèi)污染。細胞污染一旦污染了支原體，會(huì )給細胞培養帶來(lái)一系列嚴重的后果。

本期內容，就細胞培養過(guò)程中，支原體污染的危害、如何預防支原體污染、如何祛除支原體污染做解讀。

一

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支原體污染的危害

支原體個(gè)頭很小，可以感染多種真核細胞系，包括研究中常用的人類(lèi)和動(dòng)物細胞系。雖然支原體感染的前期，可能并不總是導致受感染細胞發(fā)生明顯變化，但它會(huì )對細胞生理學(xué)和實(shí)驗結果產(chǎn)生重大影響。

支原體影響細胞生長(cháng)的主要方式之一是改變細胞代謝。支原體已被證明會(huì )耗盡培養基中的葡萄糖和氨基酸等營(yíng)養物質(zhì)，從而導致細胞生長(cháng)和增殖減少。此外，支原體會(huì )產(chǎn)生對細胞有毒的代謝廢物，例如過(guò)氧化氫和氨。

支原體感染還可以改變受感染細胞中基因和蛋白質(zhì)的表達。研究表明，支原體可以誘導基因表達和可變剪接的變化，從而導致蛋白質(zhì)表達和細胞功能的改變。例如，支原體感染已被證明可以下調參與細胞周期調節的基因，并上調參與炎癥和免疫反應的基因。

支原體影響細胞生長(cháng)的另一種方式是誘導細胞應激反應。支原體感染已被證明可激活細胞應激通路，如未折疊蛋白反應和自噬，這可導致細胞功能改變和細胞活力降低。

支原體還會(huì )影響受感染細胞在檢測和實(shí)驗中的行為。支原體污染會(huì )導致實(shí)驗結果的可變性增加、再現性降低以及假陽(yáng)性或假陰性結果的產(chǎn)生。此外，支原體可以改變細胞對藥物和其他刺激的反應，這可能導致關(guān)于藥物療效或毒性的錯誤結論。

總之，支原體污染會(huì )對細胞生長(cháng)和行為以及實(shí)驗結果產(chǎn)生重大影響。研究人員應采取適當措施預防、檢測支原體污染。

二

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支原體污染的預防

防止支原體污染的第一步是保持無(wú)菌實(shí)驗室環(huán)境。所有設備和表面都必須使用適當的試劑定期清潔和消毒，培養箱水槽等水浴環(huán)境，也應防止消毒劑成分。此外，在處理細胞培養物時(shí)應佩戴手套和實(shí)驗室外套等個(gè)人防護設備，以防止意外污染。

德國Minerva Biolabs生產(chǎn)

支原體祛除噴霧

Mycoplasma-off

德國Minerva Biolabs生產(chǎn)

水槽支原體預防試劑

Water Shield

另一個(gè)重要措施是在細胞培養過(guò)程的所有步驟中使用無(wú)菌試劑和培養基。這包括使用無(wú)菌移液器、過(guò)濾器和其他一次性設備。所有培養基和試劑都應適當儲存以防止污染。

應盡可能使用之前經(jīng)過(guò)測試和證明不含支原體的細胞系。定期檢測細胞培養物是否存在支原體污染也很重要，即使使用經(jīng)過(guò)認證的細胞系也是如此。

三

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支原體的檢測

如何檢測支原體前期內容我們也有詳細講過(guò)，有常規PCR檢測試劑盒以及qPCR檢測試劑盒兩大類(lèi)可供選擇。

具體內容可以參考下面這篇文章：

『支原體檢測方法』到底應該怎樣選？

四

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支原體的祛除

如果在細胞培養物中檢測到支原體污染，必須立即采取措施消除污染。第一步是將受影響的培養物與其他細胞培養物隔離，以防止污染擴散。

受影響的培養物應該被丟棄，并對環(huán)境進(jìn)行清潔，參考支原體預防這一章節的內容。新的培養物應該從冷凍儲備或無(wú)支原體細胞系開(kāi)始。

針對不同類(lèi)型的培養物，還可選擇用于細胞中的支原體祛除試劑：

Zell Shield

對于費力擴增的細胞（如已染，或經(jīng)過(guò)體外刺激），如果細胞中發(fā)現有支原體污染，但此細胞又不愿丟棄，希望繼續培養，推薦使用MB公司生產(chǎn)的復合抗生素Zell Shield。

Mynox

無(wú)法長(cháng)期培養的珍貴樣本或病毒收獲液，則推薦使用德國MB公司的Mynox® ，處理3小時(shí)，直接殺除。

Mynox Gold

可以培養超過(guò)一個(gè)月的細胞，則推薦使用德國MB公司的Mynox® Gold，直接殺除+鞏固防護兩步處理。