研究發(fā)現新疫苗可增強CAR-T，支原體檢測助力科研

細胞治療項目離不開(kāi)支原體檢測。qPCR支原體檢測法（NAT法），相較于藥典中傳統的培養法和指示細胞法，NAT法方便快捷、準確性高、特異性強。 

使用嵌合抗原受體(CAR) T細胞的過(guò)繼細胞療法(ACT)已經(jīng)改變了復發(fā)/難治性CD19+ B細胞急性淋巴細胞白血病和淋巴瘤的治療。在實(shí)體瘤的情況下，盡管在解決腫瘤浸潤有限、CAR - T功能差和持久性等問(wèn)題方面取得了進(jìn)展，但迄今為止，CAR - T治療還不太成功。

然而，CAR - T細胞治療腫瘤的兩個(gè)關(guān)鍵挑戰是預先存在的抗原異質(zhì)性，即并非所有腫瘤細胞都表達CAR靶向的抗原，以及治療過(guò)程中發(fā)生的抗原丟失。例如，最近的一項人體臨床試驗評估了靶向突變EGFRvIII的CAR - T細胞在膠質(zhì)母細胞瘤(GBM)中的作用，結果出現了EGFRvIII腫瘤即使在最初對CD19 CAR - T治療有反應的白血病患者中，也經(jīng)常觀(guān)察到CD19抗原的缺失或下調，并經(jīng)常導致疾病復發(fā)抗原丟失的另一種機制是通過(guò)炎癥誘導的黑素瘤去分化這些觀(guān)察結果強調需要新的方法來(lái)解決抗原損失介導的腫瘤逃逸。

抗原擴散(AS)是對不同于原始治療靶點(diǎn)的次級抗原的免疫反應的誘導和擴增在ACT的背景下，利用CAR - T細胞靶向一種表面表達抗原，同時(shí)誘導內源性T細胞對其他腫瘤抗原的反應，將是克服腫瘤異質(zhì)性和抗原損失介導逃逸的一種有吸引力的方法。越來(lái)越多的證據表明，在癌癥免疫治療期間，AS可以引起并可能有助于整體治療結果。例如，在接受ipilimumab治療的患者中發(fā)現了治療前無(wú)法檢測到的腫瘤特異性T細胞的募集和擴增。

一些接受新抗原疫苗治療的癌癥患者也對共同的新抗原或癌睪丸抗原表現出AS。此外，在臨床前和臨床CAR - T細胞治療的少數病例中，抗腫瘤抗體反應增加或T細胞反應減弱。盡管如此，迄今為止，CAR - T細胞療法本身誘導具有治療意義的AS的證據有限。臨床前，大多數CAR - T研究使用免疫缺陷小鼠，根據定義排除內源性T細胞反應。在免疫能力強的小鼠模型中，CAR - T療法本身觸發(fā)AS的能力似乎有限，尤其是在實(shí)體瘤中相比之下，CAR - T細胞工程與額外的免疫反應引發(fā)分子，包括FLT3L、CD40L、 IL-12、IL-18、和IL-7/CCL或當與溶瘤病毒聯(lián)合使用已被報道顯示出增強的抗腫瘤活性和證據。

然而，將這些額外的效應功能引入到具有統一活性的CAR - T細胞中可能具有挑戰性，并導致新的安全風(fēng)險。更重要的是，無(wú)論CAR - T細胞的形態(tài)如何，在ACT過(guò)程中AS被促進(jìn)的機制仍然知之甚少。

近日，研究人員在《Cell》上發(fā)表了一篇標題為：“Vaccine-boosted CAR T crosstalk with host immunity to reject tumors with antigen heterogeneity"的文章，描述了一種增強實(shí)體腫瘤中CAR - T活性的方法，即通過(guò)淋巴結中的CAR - T細胞的疫苗樣增強CAR - T細胞這是通過(guò)合成與兩親性聚合物脂質(zhì)尾部結合的CAR配體來(lái)完成的，在腸外注射后，CAR - T配體有效地運輸到引流淋巴結(dln)，并用CAR - T配體修飾巨噬細胞和樹(shù)突狀細胞(DCs)的表面。CAR - T細胞在淋巴結中遇到配體修飾的樹(shù)突狀細胞，通過(guò)CAR與天然共刺激受體信號和來(lái)自配體呈遞細胞的細胞因子刺激一起接受刺激，導致CAR - T細胞擴增和功能增強。通過(guò)給藥這些“amph-配體"和疫苗佐劑來(lái)增強CAR - T細胞的疫苗，大大增強了CAR - T細胞治療對腫瘤的排斥反應，并且出乎意料地伴隨著(zhù)內源性抗腫瘤T細胞反應的發(fā)展。

研究人員使用CAR - T療法與疫苗增強相結合的方法作為模型設置，以了解as在清除抗原性異質(zhì)實(shí)體瘤中的作用，并確定as的潛在機制。在多個(gè)小鼠同基因腫瘤模型中，我們發(fā)現使用第二代CAR - T細胞治療引起的AS可以忽略不計。然而，即使在淋巴細胞耗竭(LD)預處理的情況下，疫苗增強CAR - T細胞也能顯著(zhù)誘導內源性T細胞啟動(dòng)。這一過(guò)程嚴重依賴(lài)于IFN-γ，通過(guò)疫苗增強或基因工程誘導的IFN-γ表達增強使CAR - T細胞能夠控制具有預先存在的抗原異質(zhì)性的實(shí)體腫瘤。