『支原體清除計劃』，為細胞培養保駕護航

支原體（mycoplasma）是一類(lèi)沒(méi)有細胞壁、高度多形性、能通過(guò)濾菌器、可用人工培養基部分培養增殖的，原核細胞型微生物。支原體也是造成生物學(xué)實(shí)驗室中，細胞污染的“主力選手"之一。

在普通光學(xué)顯微鏡下，幾乎看不到支原體的身影，因此如果細胞被支原體污染，前期很難被發(fā)現，而支原體污染，又會(huì )對細胞實(shí)驗產(chǎn)生嚴重的影響，包括但不限于以下幾點(diǎn)：

1、支原體感染細胞株會(huì )導致細胞失去正常生長(cháng)和功能，影響實(shí)驗結果的可靠性和準確性。它可以導致細胞形態(tài)的改變、細胞增殖的異常以及細胞功能的異常。

2、支原體在細胞培養中傳播非常迅速，很容易通過(guò)細胞培養物、細胞懸液、細胞培養用具等途徑傳播到其他細胞培養中，進(jìn)一步污染更多的細胞株。

3、支原體感染可能導致實(shí)驗結果的誤解，因為實(shí)驗結果中的觀(guān)察結果可能不再是由所研究的細胞本身導致的，而是由支原體感染導致的變化。

因此，要通過(guò)有效、安全、高效的手段，預防/清除支原體污染。關(guān)于與支原體的“大戰"，我們總結了以下幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)，希望本期“支原體清除計劃"可以為大家的細胞實(shí)驗帶來(lái)幫助。

Round 1：實(shí)驗室環(huán)境的清潔

細胞實(shí)驗，需要在嚴格無(wú)菌的環(huán)境下進(jìn)行。因此，維持實(shí)驗室的無(wú)菌環(huán)境十分重要。實(shí)驗環(huán)境包括實(shí)驗空間、實(shí)驗室內的儀器設備、實(shí)驗人員。

可采用甲醛高錳酸鉀熏蒸消毒的方法對實(shí)驗室內部空間進(jìn)行消毒，消毒期間需人員撤離，密閉消毒空間24h以上，該方法雖然能有效對實(shí)驗空間進(jìn)行清潔消毒，但甲醛有刺激氣味，對人和細胞都有毒性作用。細胞間1-2周無(wú)法使用，因此更推薦用紫外線(xiàn)燈進(jìn)行照射滅菌。在每次實(shí)驗開(kāi)始前，打開(kāi)紫外線(xiàn)燈，設置好安全標識，照射實(shí)驗室內部空間30分鐘以上，也能達到不錯的滅菌效果。

對于實(shí)驗室內的儀器設備，可采用消毒液、75%酒精擦拭等方法進(jìn)行消毒。該方法中所使用的消毒試劑，多數也都有揮發(fā)性，對操作人員有毒性作用，且對部分微生物無(wú)效。

因此，推薦使用更為專(zhuān)業(yè)的微生物祛除試劑：Mycoplasma-off支原體祛除噴霧劑（即用型），含有支原體殺除劑Mynox®，可在幾分鐘內迅速殺除支原體。，并且對絕大部分真菌細菌甚至是病毒都有效。

使用起來(lái)便捷高效，將Mycoplasma-Off®均勻噴于待消毒的潔凈臺或實(shí)驗設備和器材的表面，等待5-10分鐘，可用用干燥紙巾將已噴過(guò)Mycoplasma-Off®的潔凈臺或實(shí)驗設備和器材的表面搽拭干凈即可。

培養箱水槽、水浴鍋這類(lèi)衛生死角，也應做好支原體預防工作，定期更換無(wú)菌水，添加用于水槽的支原體清除試劑：Water Shield™  。

實(shí)驗人員在細胞實(shí)驗開(kāi)始前，也應做好相應的消毒防護。使用適當的個(gè)人防護裝備，如手套、口罩和防護服等；以及遵循良好的實(shí)驗室操作，如避免不同來(lái)源的培養物之間的接觸；在實(shí)驗過(guò)程中，嚴格遵守實(shí)驗室中物品擺放準則，以培養箱舉例：培養皿擺放密度應合理，宜少不宜多等。

Round 2：選擇高品質(zhì)的實(shí)驗試劑

實(shí)驗試劑也是細胞支原體污染的來(lái)源之一，選擇合規的、高品質(zhì)的實(shí)驗試劑也是預防支原體污染的關(guān)鍵點(diǎn)之一。

胎牛血清作為細胞培養實(shí)驗中重要的添加成分，含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(cháng)因子、激素、無(wú)機物等，其組成成份大部分已知，但還有一部分尚不清楚，這些物質(zhì)對促進(jìn)細胞生長(cháng)或抑制生長(cháng)活性是達到生理平衡的。其品質(zhì)直接影響實(shí)驗結果的穩定性。

高品質(zhì)的血清，應通過(guò)各類(lèi)嚴格的質(zhì)量檢測、各項指標均應符合標準并能提供檢測報告。其中，微生物及病毒相關(guān)的檢測項目，均應呈現“未檢出"。

Ausbian進(jìn)口特級胎牛血清，不僅在微生物檢測指標方面符合標準，內毒素含量也很低，≤3EU/ml，澳洲血源，全程冷鏈運輸，盡可能避免反復凍融的情況發(fā)生。

Round 3：監控細胞狀態(tài)

在進(jìn)行細胞實(shí)驗期間，要密切監測細胞培養物的污染跡象，對于細胞狀態(tài)突變保持警惕（如培養基頻繁變色、細胞生長(cháng)緩慢等）。在細胞復蘇、細胞凍存或者進(jìn)行其他關(guān)鍵的實(shí)驗操作步驟前，如條件允許，建議對細胞進(jìn)行取樣，進(jìn)行支原體檢測，包括常規PCR和qPCR等方法，方便快捷。

如果需要進(jìn)行方法學(xué)驗證，則推薦使用Venor®GeM qEP支原體qPCR檢測試劑盒。配合Venor®GeM Sample Preparation支原體DNA提取試劑盒以及支原體標準品一起使用，完成方法學(xué)驗證。

Round 4：支原體祛除 

對于費力擴增的細胞（如已轉染，或經(jīng)過(guò)體外刺激），如果細胞中發(fā)現有支原體污染，但此細胞又不愿丟棄，希望繼續培養，推薦使用MB公司生產(chǎn)的復合抗生素Zell Shield®。在每次使用Zell Shield®之前，細胞傳代時(shí)，先使用廠(chǎng)家推薦的“懸浮沖洗法"處理好細胞，再使用加了Zell Shield®的培養基養細胞，能達到更好的祛除支原體的效果。

非常珍貴的細胞或不易獲得的生物樣本，被支原體污染了，但需要挽救，不能丟棄， 例如：稀有的細胞種子?？刹捎弥гw清除法。 若是可以培養超過(guò)一個(gè)月的細胞，則推薦使用德國MB公司的Mynox® Gold，直接殺除+鞏固防護兩步處理。

若是無(wú)法長(cháng)期培養的珍貴樣本或病毒收獲液，則推薦使用德國MB公司的Mynox® ，處理3小時(shí)，直接殺除。