在細胞治療、疫苗生產(chǎn)等領(lǐng)域,藥物在上市前,需要通過(guò)支原體檢測,證明生產(chǎn)過(guò)程中沒(méi)有支原體的污染。一般情況下,支原體附著(zhù)在細胞表面,因此,在檢測前,收集細胞后,保留上清,用于后續檢測實(shí)驗。
德國MB公司生產(chǎn)的Venor®GeM qEP試劑盒設計用于定量檢測細胞培養物和其他生物基質(zhì)中的支原體, 該試劑盒是基于實(shí)時(shí)或定量PCR (qPCR),作為快速,穩健和敏感支原體的,可替代《藥典》種傳統方法的檢測手段。
該檢測針對支原體基因組中的一個(gè)高度保守區域,以檢測歐洲藥典第2.6.7章(EP 2.6.7)、日本藥典第G3章(JP G3)和更多物種(見(jiàn)“檢測特征"一節中的列表)中包含的所有物種。
該產(chǎn)品已通過(guò)廣泛的qPCR設備成功測試。試劑盒設計滿(mǎn)足EP 2.6.7和JP G3對不同樣品材料(軟骨細胞、血清、細胞培養上清等)提取樣品DNA后的檢測標準。
實(shí)驗開(kāi)始時(shí),需要先收集細胞培養上清,如果細胞含量較低,可對培養物進(jìn)行富集。用支原體提取試劑盒,對其中的DNA進(jìn)行提取。
整個(gè)測試需要不到3小時(shí),并且與基于發(fā)光的酶測定、熒光染色或培養方法相比,不需要活的支原體細胞。值得注意的是,與幾種生化和細胞方法相比,PCR檢測被認為在靈敏度和精度方面*。該試劑盒包含所有必要的PCR成分,包括熱啟動(dòng)Taq聚合酶,引物和dNTPs在凍干混合物(支原體混合物)以及補液緩沖液和PCR級水。
德國MB還可提供10CFU/100CFU的配套標準品,以及各類(lèi)支原體基因組DNA,幫助相關(guān)項目完成藥典的方法學(xué)驗證。