CRISPR系統的實(shí)際應用，PCR Clean™助力科研

CRISPR是一種常見(jiàn)的基因編輯技術(shù)。此類(lèi)操作對實(shí)驗室中，核酸污染的控制有比較高的要求。德國MB公司生產(chǎn)的PCR Clean™，即用型核酸污染祛除噴霧，可直接噴灑在待清潔物品表面，風(fēng)干即可，便捷高效地清除DNA、RNA, 以及DNA酶、RNA酶等核酸污染。

CRISPR系統在生物學(xué)相關(guān)的許多領(lǐng)域，都有應用。近日，發(fā)表在《Nature》上，標題為：“CD300ld on neutrophils is required for tumour-driven immune suppression"的文章，在腫瘤小鼠模型中進(jìn)行了體內CRISPR-Cas9篩選，并確定CD300ld是腫瘤有利受體的關(guān)鍵候選。

免疫檢查點(diǎn)阻斷在腫瘤治療中取得了相當大的成功。然而，很大一部分患者對這些治療只有很小的反應，甚至沒(méi)有反應。以骨髓細胞含量高為特征的免疫抑制腫瘤微環(huán)境(TME)是有效免疫治療的主要障礙。

中性粒細胞是一種數量豐富且種類(lèi)繁多的髓樣細胞，提供先天防御急性感染或炎癥。在癌癥和其他病理性慢性炎癥的情況下，異常的粒細胞生成顯著(zhù)增加骨髓中中性粒細胞的釋放。這些中性粒細胞在功能上受到干擾，特別是在晚期癌癥中，表現出高度的可塑性，并促進(jìn)了腫瘤發(fā)生的直接和間接機制。這種病理活化的中性粒細胞表現出強大的免疫抑制活性，在功能上被命名為PMN-MDSCs或粒細胞髓源性抑制細胞(g-MDSCs)，在小鼠和人類(lèi)腫瘤發(fā)生中成為TME的關(guān)鍵組成部分。

多種中性粒細胞發(fā)育狀態(tài)在腫瘤中共存。PMN-MDSCs和經(jīng)典中性粒細胞具有相同的髓系起源和表面標記，然而，它們在功能上是不同的，并且很少有原型遺傳和表型標記來(lái)區分它們。在腫瘤環(huán)境中，大多數中性粒細胞被證明是具有免疫抑制活性的PMN-MDSCs。PMN-MDSCs在大多數類(lèi)型的癌癥中擴增，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展并導致對免疫治療的不良反應。需要鑒定參與PMN-MDSCs募集和功能的關(guān)鍵分子，以選擇性地靶向PMN-MDSCs進(jìn)行腫瘤治療。

在這項研究中，科研人員通過(guò)表征細胞表面蛋白，確定CD300ld是PMN-MDSCs中存在的關(guān)鍵免疫抑制因子，為癌癥免疫治療提供了克服TME免疫抑制的潛在靶點(diǎn)。

總結：

科研人員通過(guò)在腫瘤小鼠模型中進(jìn)行了體內CRISPR-Cas9篩選，確定CD300ld是腫瘤有利受體的候選。CD300ld在正常中性粒細胞中特異性表達，在PMN-MDSCs中發(fā)生腫瘤后表達上調。CD300ld敲除以pmn - mdsc依賴(lài)的方式抑制多種腫瘤類(lèi)型的發(fā)展。CD300ld是PMN-MDSCs募集進(jìn)入腫瘤及其抑制T細胞激活功能所必需的。CD300ld通過(guò)STAT3-S100A8/A9軸起作用，敲除CD300ld逆轉腫瘤免疫抑制微環(huán)境。CD300ld在人類(lèi)癌癥中表達上調，并與患者生存表現出不利的相關(guān)性。阻斷CD300ld活性可抑制腫瘤發(fā)展，并與抗pd1具有協(xié)同作用。我們的研究發(fā)現CD300ld是PMN-MDSCs中一個(gè)關(guān)鍵的免疫抑制因子，是腫瘤免疫抵抗所必需的，并為癌癥免疫治療提供了一個(gè)潛在的靶點(diǎn)。