細胞支原體污染癥狀及處理方法

細胞污染是生物實(shí)驗室中常見(jiàn)的問(wèn)題之一，輕則引起細胞狀態(tài)改變，降低實(shí)驗結果的可重復性，重則會(huì )直接導致細胞的死亡，影響實(shí)驗進(jìn)度。本期內容，我們匯總了支原體污染的癥狀，并分別給出了應對方法。

一、生物污染

細胞的體外生存環(huán)境，可以說(shuō)是“危機四伏"?？諝庵衅≈?zhù)各種肉眼難以捕捉的微生物，稍有不慎，細胞就會(huì )被感染。不僅如此，如果實(shí)驗操作不夠規范，還有可能出現細胞交叉污染的情況。

1、支原體污染

支原體（mycoplasma）是一類(lèi)沒(méi)有細胞壁、高度多形性、部分可用人工培養基培養增殖的原核細胞型微生物，大小為0.3微米左右。由于能形成絲狀與分枝形狀，故稱(chēng)為支原體。在細胞培養過(guò)程中，顯微鏡很難捕捉到它們的身影，與細胞競爭營(yíng)養，影響細胞生長(cháng)，最終導致實(shí)驗出現偏差。

支原體的培養條件，與細胞培養條件高度重合，因此，支原體會(huì )與細胞共同競爭有限的生存資源。早有研究表明，一些支原體（包括最為常見(jiàn)的人型支原體、發(fā)酵支原體、精氨酸支原體等），通過(guò)精氨酸脫亞胺酶分解精氨酸來(lái)供能。當這些支原體混入細胞培養體系后，會(huì )與細胞爭搶精氨酸，導致細胞“吃不飽飯"，出現營(yíng)養不良的癥狀：生長(cháng)速率異常、活力下降、易脫壁等。而精氨酸又是細胞組蛋白的重要組成成分，缺乏精氨酸會(huì )嚴重影響組蛋白合成，引起染色體斷裂。再加上細胞處于長(cháng)期饑餓的狀態(tài)，最終導致細胞生長(cháng)變慢甚至死亡。

支原體通過(guò)黏附作用與細胞結合，獲取細胞膜表面的脂質(zhì)和膽固醇，破壞細胞膜的完整性，同時(shí)影響細胞間的信號傳遞。支原體會(huì )趁機侵入細胞，增加細胞中核酸內切酶的含量[2]，導致細胞染色體異常進(jìn)而死亡。經(jīng)過(guò)支原體的這一番操作，細胞結構已經(jīng)被嚴重破壞，隨之而來(lái)的就是細胞形態(tài)改變、細胞易聚團、大面積細胞凋亡制造的蛋白碎片（也就是培養基中的碎片和小黑點(diǎn)）

正常情況下，培養基中養分會(huì )逐漸耗盡，細胞代謝廢物會(huì )逐漸累積，上清液會(huì )變成黃色，因此要定期更換培養基。支原體也是如此——當培養體系中感染了支原體并大量繁殖的時(shí)候，會(huì )向外排放代謝產(chǎn)物，影響體系中的PH，加快培養基變黃的速度。

綜上所述，如果你培養的細胞出現以下情況，基本可以確定是支原體感染了，可配合支原體檢測試劑盒（Venor®Gem OneStep，貨號：11-8025）進(jìn)一步確認。

如果細胞被支原體污染，該如何處理？對于一些重要程度相對較低的細胞而言，祛除支原體成分較高，因此，此類(lèi)被污染的培養物建議直接丟棄。

對于無(wú)法長(cháng)期培養的珍貴樣本或病毒收獲液，則推薦使用德國MB公司的Mynox® （貨號：10-0200）。含有來(lái)自枯草桿菌提取物，可特異性地與支原體膜結合，改變支原體膜通透性，從而使支原體在2-3小時(shí)內破潰死亡。

若是可以培養超過(guò)一個(gè)月的細胞，則推薦使用德國MB公司的Mynox® Gold（貨號：10-0201），直接殺除+鞏固防護兩步處理，祛除支原體的同時(shí)，可進(jìn)一步在后續培養中鞏固清除效果，防止支原體“卷土重來(lái)"。

 細胞已發(fā)生支原體污染，但又不愿丟棄，希望繼續培養：如已轉染或大量擴增的細胞的情況。復合抗生素成分，抑制支原體蛋白和DNA合成，也抑制細菌和真菌。先使用廠(chǎng)家推薦的“懸浮沖洗法"處理好細胞，再使用加了Zell Shield®（貨號：13-0050）的培養基養細胞，能達到更好的祛除支原體的效果。

與此同時(shí)，還應對細胞間進(jìn)行消殺。使用專(zhuān)業(yè)的支原體祛除試劑，更加高效、安全和便捷。實(shí)驗空間中的墻壁、實(shí)驗臺、桌椅板凳、顯微鏡、冰箱、離心機等設備和儀器，可使用Mycoplasma-off™或Mycoplasma-off™ Wipes對其進(jìn)行噴涂或擦拭，清除表面的多種微生物污染。對于水浴鍋、培養箱水槽等環(huán)境，可以選擇Water Shield™對其進(jìn)行處理。講產(chǎn)品按比例直接加入水浴鍋或培養箱水槽中，可預防微生物污染。