如何讓細胞更健康？清除實(shí)驗室污染很重要

細胞培養的成功與否直接關(guān)系到實(shí)驗結果的準確性和可重復性。微生物污染是影響細胞培養健康的重要因素之一。因此，在實(shí)驗室工作和細胞培養過(guò)程中，高效預防或清除微生物污染十分重要。本期內容，一起來(lái)討論細胞實(shí)驗室中，預防、清除微生物污染的好方法。

一、如何預防細胞實(shí)驗中的微生物污染

1、用科學(xué)有效的方法清潔實(shí)驗環(huán)境

我們匯總了各大實(shí)驗室的工作流程，希望可以給各位科研工作者提供參考：

實(shí)驗室環(huán)境定期清潔：定期使用 Mycoplasma-off™支原體祛除噴霧劑（或濕巾），對工作區域消殺（建議半個(gè)月一次，但需根據細胞間實(shí)際使用頻率決定）。

實(shí)驗開(kāi)始前的滅菌工作：每次實(shí)驗開(kāi)始前，和實(shí)驗結束后，用紫外線(xiàn)對細胞間進(jìn)行照射消毒，實(shí)驗操作前用酒精或Mycoplasma-off™支原體祛除噴霧劑對操作人員的手套進(jìn)行噴涂消毒。

實(shí)驗儀器的定期清潔：在水浴鍋或培養箱水槽的水中，加入 0.5% 的 Water Shield™水槽支原體預防祛除試劑，可確保一個(gè)月內水源不會(huì )變成支原體、真菌或細菌的污染源。液氮罐也應定期用Mycoplasma-off™支原體祛除噴霧劑（或濕巾）進(jìn)底消殺，并更換潔凈的液氮，（液氮罐中凍存的細胞發(fā)生支原體污染，也會(huì )在液氮中引起污染的傳播）。

2、選擇合格的實(shí)驗試劑

生物學(xué)實(shí)驗很大程度上依賴(lài)各類(lèi)生物學(xué)試劑的支持，其中，胎牛血清作為一種十分常見(jiàn)的生物學(xué)試劑，在細胞培養實(shí)驗中發(fā)揮著(zhù)重要作用，可以維持細胞的生長(cháng)和健康。選擇高品質(zhì)的胎牛血清，能夠盡可能降低細胞污染的風(fēng)險。以實(shí)驗室常用的Ausbian進(jìn)口胎牛血清為例，通過(guò)經(jīng)7次加壓過(guò)濾，最后3次為0.1 µm無(wú)菌過(guò)濾處理，通過(guò)嚴格的質(zhì)量檢測，所有微生物檢測均為“未檢出"，有許多實(shí)驗長(cháng)期使用，為眾多科研用戶(hù)發(fā)布高水平文章提供支持。

3、嚴謹規范的實(shí)驗操作

實(shí)驗開(kāi)始前：在正式進(jìn)入細胞間前，需要在緩沖隔離間佩戴好細胞實(shí)驗室專(zhuān)用的防護用具：口罩、防護服、鞋套等，開(kāi)始實(shí)驗前，佩戴好手套。

實(shí)驗進(jìn)行中：嚴格按照實(shí)驗室的規章制度進(jìn)行實(shí)驗操作，注意不要交叉污染試劑，另外實(shí)驗安全、實(shí)驗垃圾的處理也要格外注意。

實(shí)驗結束后：用Mycoplasma-off™支原體祛除噴霧劑是所使用過(guò)的實(shí)驗臺面、物品表面進(jìn)行清潔。

二、如何祛除細胞中的微生物污染

當細胞被細菌、真菌或是支原體污染后，都不建議繼續培養，盡量能夠直接銷(xiāo)毀，并對實(shí)驗環(huán)境進(jìn)行全面地清潔消毒。多數情況下，被真菌或細菌污染的細胞，“發(fā)病"迅速，還沒(méi)來(lái)得及拯救，細胞就會(huì )集體“陣亡"。因此，如果細胞十分珍貴，不能隨意丟棄，也建議僅對支原體污染的細胞進(jìn)行拯救。

祛除細胞中支原體的有效方法：

1、對于非常珍貴的細胞株（不可再得的）國際上使用 Mynox® Gold珍貴細胞株支原體清除試劑，做 4 周左右的支原體祛除持續培養實(shí)驗。

2、對于非常珍貴的細胞株或生物樣品（無(wú)法長(cháng)期培養的），可使用 Mynox®珍貴生物樣品支原體清除試劑，對細胞做 3 小時(shí)左右的祛除支原體處理，處理完畢，沖洗細胞，將樣品放入潔凈的培養液中，重新培養或保存即可。

3、對于已經(jīng)進(jìn)行到中途的細胞實(shí)驗，如果將培養的大量細胞丟棄，會(huì )造成高昂的實(shí)驗成本損失。對于這樣的情況，補救辦法如下：在培養液中加入 10% 的 Zell Shield®細胞支原體祛除試劑（一種新型復合抗生素）。按照廠(chǎng)家建議“懸浮沖洗"方法，配合處理細胞，培養 4 代以上，基本可祛除支原體污染。

懸浮沖洗法：

細胞消化后，將細胞轉移至離心管進(jìn)行離心，棄上清，加入PBS沖洗細胞后再次速離心棄上清，重復PBS沖洗過(guò)程3次后，用新鮮的含Zell Shield®細胞支原體祛除試劑的細胞培養液進(jìn)行培養傳代

①Zell Shield®細胞支原體祛除試劑常規為-18℃保存，建議使用前，先融化分裝，仍舊-18℃避光保存，使用時(shí)按需融化配制。避免反復凍融。

②Zell Shield®細胞支原體祛除試劑按1:100濃度可直接加入培養基。例如：500ml培養基中添加5ml Zell Shield®細胞支原體祛除試劑，50mL/瓶的Zell Shield®細胞支原體祛除試劑可供5L培養基使用。

4、一些做原代培養的實(shí)驗室，為了預防取原代細胞過(guò)程中可能會(huì )發(fā)生支原體污染，實(shí)驗人員也可以在培養液中加入 10% 的 Zell Shield®（一種新型復合抗生素），培養 4 代以上，即可撤掉 Zell Shield®，此過(guò)程可有效預防支原體污染的發(fā)生。