大腸桿菌計數標準解讀ISO 16649-1：2018

大腸桿菌和糞大腸菌群的計數一致是一項食品衛生的常規檢測。2018年，ISO發(fā)布了新版ISO 16649-1：2018，即“食品鏈的微生物學(xué)——β-葡萄糖醛酸酶陽(yáng)性大腸桿菌計數的水平方法.第1部分 使用膜和5-溴-4-氯-3-吲哚β-D-葡萄糖醛酸酐在44℃的菌落計數技術(shù)”。

ISO 16649-1:2018取代的是ISO 16649-1:2001,在如下方面有修改：

1）環(huán)境和初級食品生產(chǎn)階段的取樣

2）對于TBX培養基（胰胨膽鹽葡萄糖醛酸酐瓊脂）孵育時(shí)間規定至少20h

3）添加了培養基和濾膜的性能試驗

4）為了安全性，不再推薦DMSO來(lái)溶解葡萄糖醛酸酶的顯色底物BCIG

5）無(wú)機鹽改良谷氨酸鹽瓊脂（MMGA）的組成進(jìn)行了調整

該標準適合食品、飼料、食品生產(chǎn)車(chē)間的環(huán)境樣本等。

在流程上，可分為如下幾步：

1）復蘇。

用無(wú)菌鑷子夾一張膜放到MMGA培養基的干燥表面，避免膜下產(chǎn)生氣泡?？捎猛坎及舭涯浩?。用無(wú)菌移液器將1ml樣本液加到膜中央，使用涂布棒將接種液均勻分布到整個(gè)膜表面。將平板在室溫靜置15分鐘，直到接種液浸透整個(gè)膜。再孵育4h±0.25h，37℃，膜/瓊脂表面朝上。

2）分離。

使用無(wú)菌鑷子將膜轉移到TBX培養基上。在孵箱中44℃孵育20h~24h。有藍色或藍綠色菌落則為葡萄糖醛酸酶陽(yáng)性的大腸桿菌。選擇典型菌落數150的平皿進(jìn)行計數。

3）結果計算和報告

世界微生物培養基生產(chǎn)商HiMedia公司提供有ISO的培養基，如無(wú)機鹽改良谷氨酸鹽瓊脂（Minervals-modified glutamate agar，MMGA），貨號為M643I，配方與ISO 16649-1:2018的*一致，只有氯化銨需用戶(hù)自己準備。對于TBX培養基，HiMedia公司提供有HiCrome™ E. coli Agar，貨號M1295I，配方與ISO 16649-1:2018的*一致。在該培養基中，大腸桿菌為藍綠色菌落，沙門(mén)氏菌為無(wú)色菌落，葡萄球菌被抑制生長(cháng)（見(jiàn)下圖）。

HiMedia公司從1975年起即致力于微生物培養基和細胞培養基的生產(chǎn)和研發(fā)，具有WHO GMP認證、ISO9001：2008，ISO13485：2003認證，CE認證和FDA注冊登記，尤其通過(guò)CE的體外診斷注冊。其產(chǎn)品行銷(xiāo)140多個(gè)國家。

締一生物作為HiMedia公司在中國的代理商，在微生物培養和檢測領(lǐng)域，一如既往地為您帶來(lái)的服務(wù)。