研究揭示單個(gè)埃博拉病毒入侵細胞動(dòng)態(tài)機制

埃博拉病毒（EBOV）是對人類(lèi)致命的病原體之一，病毒感染引起嚴重出血熱，致死率可達90%。病毒進(jìn)入宿主細胞是感染過(guò)程中的頭一步也是關(guān)鍵的一步，但其入侵機制仍有待研究。

近，中國科學(xué)院武漢病毒研究所研究員崔宗強與長(cháng)春工業(yè)大學(xué)教授單玉萍、國家納米科學(xué)中心研究員施興華合作，基于單顆粒力示蹤、動(dòng)力學(xué)模擬和單顆粒熒光示蹤技術(shù)，實(shí)時(shí)揭示了單個(gè)EBOV的入侵動(dòng)態(tài)過(guò)程和動(dòng)力學(xué)機制。

研究人員首先構建了絲狀埃博拉病毒樣顆粒（EBO-VLP）并對其進(jìn)行熒光標記，該絲狀結構EBO-VLP和野生型EBOV具有同樣的入侵細胞能力，但其內部沒(méi)有病毒核酸，不能復制。研究人員利用雙功能PEG Linker將EBO-VLP連接到原子力顯微鏡的探針上，通過(guò)力示蹤技術(shù)實(shí)時(shí)監測單個(gè)EBO-VLP內吞進(jìn)入細胞的動(dòng)態(tài)過(guò)程。

結果發(fā)現，EBO-VLP可以通過(guò)水平或垂直兩種模式進(jìn)入細胞，兩種模式對應的力和時(shí)間不同。對兩種模式進(jìn)行分子動(dòng)力學(xué)模擬，也說(shuō)明EBO-VLP以垂直方向進(jìn)入細胞比水平模式所需時(shí)間更長(cháng)，所需能量（也就是力）更大。通過(guò)分析計算力示蹤檢測到的內吞力信號，推測大約有九個(gè)受體結合位點(diǎn)在EBO-VLP入侵過(guò)程中參與病毒內吞。實(shí)時(shí)單顆粒熒光示蹤顯示EBO-VLP與細胞巨胞飲標志物能夠很好地共定位，并具有相同的運動(dòng)速率、軌跡、均方位移等，巨胞飲抑制劑可以顯著(zhù)抑制其入侵，從而可視化地證實(shí)了EBO-VLP是以巨胞飲途徑入侵細胞。

該研究實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)解析了單個(gè)EBO-VLP入侵宿主細胞過(guò)程，揭示了絲狀EBO-VLP以水平或垂直兩種模式進(jìn)入細胞，以及對應的力學(xué)、時(shí)-空、能量、與受體作用方式、入侵途徑等精細機制，對深入理解EBOV的感染機理具有重要意義，也為開(kāi)發(fā)抗病毒途徑提供了基礎。

采用Ausbian進(jìn)口特級胎牛血清，透析過(guò)濾去除10000D以下小分子（如次黃嘌呤和胸腺核苷），避免外源小分子對細胞產(chǎn)生干擾。適合脈沖示蹤實(shí)驗（例如同位素標記特定小分子，并加入到培養體系中，以研究細胞代謝），也適合轉染CHO后的篩選等應用。

關(guān)于熱滅活

胎牛血清不推薦熱滅活。

熱滅活一般是指在做免疫相關(guān)的試驗中，通過(guò)加熱滅活掉血清中的補體，以避免對免疫試驗的影響。