淺談qPCR檢測中「內參」的意義

實(shí)時(shí)熒光定量

核酸擴增檢測系統

qPCR主要是利用插入性染料或熒光探針，人們可以通過(guò)監控PCR過(guò)程中的熒光強度比較多個(gè)樣品的DNA水平。

qPCR本質(zhì)就是測定樣品中某個(gè)模板的起始量ct值。但在實(shí)際操作過(guò)程中，由于之前DNA提等步驟，各個(gè)步驟存在不同的效率，在實(shí)驗過(guò)程中也存在加樣誤差、各孔溫度差等影響，每個(gè)樣本的Ct值并無(wú)法真實(shí)反映每個(gè)樣品中初始模版的絕對量，這就使得我們無(wú)法對不同處理的樣本進(jìn)行分析評價(jià)。因此，我們需要一個(gè)參考標準對每一個(gè)樣本進(jìn)行校正，排除其他無(wú)關(guān)因素帶來(lái)的的影響。

內控(內參，Internal Control)，也就是內部參照測量，也叫內部控制。使用內參的目的是便于在分析過(guò)程中，將不同樣品的起始量做均一化處理。內參通常選擇在不同組織中有穩定表達量或不受實(shí)驗處理影響的基因，在每個(gè)樣品中的表達量不發(fā)生變化，比如管家基因（house-keeping gene）。以小鼠為例，常用的內參有β-actin、18S rRNA、α-tublin和GAPDH等，有時(shí)也可以用基因組DNA做內參。

但需要注意的是，現在也有觀(guān)點(diǎn)認為，這些基因在不同組織中豐度也不同，例如GAPDH，在線(xiàn)粒體含量高的組織中豐度高。有時(shí)候，不同的研究實(shí)驗需要選擇不同的內參。一些文章在發(fā)表時(shí)，審稿人也會(huì )要求使用兩個(gè)內參加以證實(shí)。

MB Venor®Gem qEP，用經(jīng)典的qPCR方法檢測樣品中是否含有支原體，其中也會(huì )用到內參（內控），可以在對支原體其作用也是對樣品做均一化處理，保證實(shí)驗結果的穩定。

MB Venor®Gem qEP

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.內控對照為獨立包裝，遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

2.高特異性，一次檢測即可涵蓋所有常見(jiàn)易感染細胞的支原體物種（包括歐洲藥典規定的9種支原體）。與細菌和真核DNA無(wú)交叉反應。

3.高靈敏度，檢測限可達到≤10CFU/ml。

4.相應配套的支原體基因組DNA和細菌基因組DNA，便于特異性驗證。

5.有相應配套的支原體定量標準品，便于最后定量檢測。