細胞復蘇有哪些注意事項

細胞培養是指細胞在體外的培養技術(shù)，即在無(wú)菌條件下，從機體中取出組織或細胞，模擬機體內正常生理狀態(tài)下生存的基本條件，讓它在培養皿中繼續生存、生長(cháng)和繁殖的方法。通過(guò)細胞培養我們可以獲得大量的、性狀相同的細胞，以便于研究細胞的形態(tài)結構、化學(xué)組成及功能和機制。

細胞真的很脆弱，就像小嬰兒一樣，需要你無(wú)微不至的關(guān)懷。

細胞培養的開(kāi)始，就是復蘇細胞。如何有條不紊地讓細胞從沉睡中蘇醒？今天就來(lái)給大家總結幾個(gè)實(shí)用小技巧，快點(diǎn)來(lái)get！

細胞復蘇流程：

1、將凍存的細胞從液氮罐中取出，立即放入37°C的水浴中進(jìn)行融化，輕柔晃動(dòng)，加速融化，直到小瓶中只剩下一小塊冰，時(shí)長(cháng)應控制在1min中；

2、用70%乙醇擦拭瓶外后轉移無(wú)菌操作臺中，打開(kāi)瓶蓋前，用酒精燈火焰對瓶口進(jìn)行消毒；

3、將預加熱的新鮮完quan培養基滴入小瓶中。緩慢用移液槍吸取瓶中液體至15ml離心管中，加入適量濃度和體積的完quan培養基，輕柔混合均勻；

4、200 × g左右細胞懸浮液離心5-10分鐘。實(shí)際的離心速度和持續時(shí)間因細胞類(lèi)型而異。棄掉上清，加入新鮮完quan培養基重懸細胞，并將其轉移到適當的培養容器和推薦的培養環(huán)境中。

細胞解凍流程圖

注意事項：

1、液氮溫度低，小心低溫對人造成的傷害，在液相中儲存的冷凍瓶在解凍時(shí)存在爆炸的風(fēng)險，因此，取出凍存管的時(shí)候，要做好個(gè)人防護。

2、通常細胞集中儲藏在液氮中，取出時(shí)應迅速，避免溫差對其他凍存細胞造成影響。

3、復蘇細胞的核心技術(shù)，簡(jiǎn)而言之就是快融，將在37°C水浴中快速解凍冷凍細胞(< 1分鐘。

4、解凍時(shí)，凍存管先放入無(wú)菌一次性PE手套中，再放入水中融化，避免污染也方便操作。

5、用預熱過(guò)的培養基慢慢稀釋解凍的細胞。

6、解凍細胞后，在培養皿中培養時(shí)，應盡量維持高密度，以提高細胞存活率。

7、注意無(wú)菌操作，避免細胞發(fā)生污染。

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