葉酸測定中樣品的收集,處理及保存的方法

　　葉酸測定試劑盒試驗原理

　　葉酸測定試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗（ELISA）.已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進(jìn)行檢測。先將生物素標記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。

　　葉酸測定試劑盒樣品收集,處理及保存方法:

　　1、血清：操作過(guò)程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。

　　2、血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

　　3、細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

　　4、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。

　　5、保存：如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

　　葉酸測定試劑盒怎么用的實(shí)驗操作步驟如下：

　　1、標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

　　2、加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

　　3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

　　4、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

　　5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

　　6、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

　　7、溫育：操作同3。

　　8、洗滌：操作同5。

　　9、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

　　10、終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。

　　11、測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值），測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

　　以上便是今天關(guān)于葉酸測定中樣品的收集,處理及保存的方法的全部分享了，希望對大家今后使用本設備能有幫助。